釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是黃酒發(fā)酵的主導微生物,也是影響黃酒品質的關鍵因素。黃酒是我國特有的古酒,具有悠久的歷史,黃酒酵母經歷了不斷的進化和適應黃酒發(fā)酵環(huán)境,形成它獨特的發(fā)酵優(yōu)勢。然而,相對于日本清酒,歐美葡萄酒的釀酒酵母菌株,黃酒酵母菌株的研究報道較少,尤其在基因功能研究方面。實驗室前期篩選得到一株具有較高酒精耐受性的單倍體黃酒釀造菌株D2,通過生物信息學分析比較它與模式實驗菌株S288c在基因組層面的差異,發(fā)現(xiàn)基因g5170所編碼蛋白質含有可催化酰胺基（CO-NH2）水解生成羧酸、胺或氨反應的酰胺酶（amidase）,預示此基因對黃酒酵母菌株的生長與代謝可能有重要作用。實驗室已經對新基因做了功能性研究與驗證,發(fā)現(xiàn)D2敲除新基因g5170后乙醇耐受性降低,所以預測新基因可能與乙醇耐受性有關。本實驗通過載體構建,將新基因g5170導入模式酵母菌BY4741中表達,并通過RT-PCR實驗做了表達驗證。在乙醇耐受性實驗中發(fā)現(xiàn)重組酵母菌株對乙醇的耐受性和生長速率都有所提高,此結果進一步了驗證新基因g5170可能與乙醇耐受性有關。為進一步培育優(yōu)良的黃酒酵母菌... 

【文章來源】：浙江工商大學浙江省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 黃酒概述
        1.1.1 黃酒的歷史及其特點
        1.1.2 黃酒釀造工藝特點
        1.1.3 釀酒酵母在黃酒釀造中的作用
    1.2 影響黃酒品質的因素
        1.2.1 乙醇對酵母菌生長發(fā)酵的影響
        1.2.2 黃酒中的氨基甲酸乙酯(EC)
    1.3 黃酒產業(yè)發(fā)展方向
        1.3.1 黃酒酵母菌株基因功能研究
        1.3.2 優(yōu)良菌株的篩選
    1.4 生物信息學分析
    1.5 本研究的目的、內容以及意義
第2章 黃酒酵母一個新基因的功能分析
    2.1 實驗的背景及意義
    2.2 實驗儀器與材料
        2.2.1 培養(yǎng)基
        2.2.2 實驗相關試劑
        2.2.3 實驗相關菌株及質粒
    2.3 實驗方法
        2.3.1 生物信息學分析
        2.3.2 g5170 基因功能研究分析
        2.3.3 重組酵母菌株的構建流程圖
        2.3.4 酵母菌的活化及小量基因組的提取
        2.3.5 目的基因g5170 的擴增
        2.3.6 質粒的提取
        2.3.7 目的基因g5170 和質粒pYES2 的雙酶切
        2.3.8 重組質粒的構建
        2.3.9 大腸桿菌感受態(tài)的制備及重組質粒的轉化
        2.3.10 菌落PCR驗證
        2.3.11 提取質粒測序驗證
        2.3.12 醋酸鋰介導的高效酵母轉化
        2.3.13 酵母重組子菌落PCR驗證
        2.3.14 重組酵母菌株半乳糖誘導前后生長動力測定
        2.3.15 重組酵母菌株酒精脅迫環(huán)境下生長動力測定
        2.3.16 重組酵母菌株外源基因轉錄(RT-PCR)定性檢測
        2.3.17 重組酵母菌株外源蛋白表達(SDS)檢測
        2.3.18 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2.4 實驗結果
        2.4.1 重組酵母菌株的構建結果
        2.4.2 重組酵母菌株半乳糖誘導前后生長動力
        2.4.3 重組酵母菌株酒精脅迫環(huán)境下生長曲線
        2.4.4 重組酵母外源基因表達檢測(RT-PCR)
        2.4.5 基因表達量檢測(RNA-Seq)
        2.4.6 初步觀察重組酵母的蛋白表達
    2.5 本章小結
第3章 低產尿素酵母菌株的篩選及相關基因分析
    3.1 實驗背景及意義
    3.2 實驗儀器與材料
        3.2.1 主要培養(yǎng)基
        3.2.2 儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 酵母菌株的分離活化
        3.3.2 精氨酸利用培養(yǎng)
        3.3.3 酵母菌基因組DNA提取
        3.3.4 酵母菌cDNA的合成
        3.3.5 精氨酸代謝相關基因分析
        3.3.6 黃酒發(fā)酵實驗
    3.4 實驗結果
        3.4.1 不同黃酒酵母菌株對精氨酸利用分析
        3.4.2 CAR1 基因相對表達量分析
        3.4.3 模擬黃酒發(fā)酵液中尿素、還原糖和酒精含量測定
    3.5 本章小結
第4章 結論與展望
    4.1 結論
    4.2 展望
參考文獻
致謝



本文編號：3188160