釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）是黃酒發(fā)酵的主導(dǎo)微生物,也是影響黃酒品質(zhì)的關(guān)鍵因素。黃酒是我國(guó)特有的古酒,具有悠久的歷史,黃酒酵母經(jīng)歷了不斷的進(jìn)化和適應(yīng)黃酒發(fā)酵環(huán)境,形成它獨(dú)特的發(fā)酵優(yōu)勢(shì)。然而,相對(duì)于日本清酒,歐美葡萄酒的釀酒酵母菌株,黃酒酵母菌株的研究報(bào)道較少,尤其在基因功能研究方面。實(shí)驗(yàn)室前期篩選得到一株具有較高酒精耐受性的單倍體黃酒釀造菌株D2,通過生物信息學(xué)分析比較它與模式實(shí)驗(yàn)菌株S288c在基因組層面的差異,發(fā)現(xiàn)基因g5170所編碼蛋白質(zhì)含有可催化酰胺基（CO-NH2）水解生成羧酸、胺或氨反應(yīng)的酰胺酶（amidase）,預(yù)示此基因?qū)S酒酵母菌株的生長(zhǎng)與代謝可能有重要作用。實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)對(duì)新基因做了功能性研究與驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)D2敲除新基因g5170后乙醇耐受性降低,所以預(yù)測(cè)新基因可能與乙醇耐受性有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過載體構(gòu)建,將新基因g5170導(dǎo)入模式酵母菌BY4741中表達(dá),并通過RT-PCR實(shí)驗(yàn)做了表達(dá)驗(yàn)證。在乙醇耐受性實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)重組酵母菌株對(duì)乙醇的耐受性和生長(zhǎng)速率都有所提高,此結(jié)果進(jìn)一步了驗(yàn)證新基因g5170可能與乙醇耐受性有關(guān)。為進(jìn)一步培育優(yōu)良的黃酒酵母菌... 

【文章來(lái)源】：浙江工商大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 黃酒概述
        1.1.1 黃酒的歷史及其特點(diǎn)
        1.1.2 黃酒釀造工藝特點(diǎn)
        1.1.3 釀酒酵母在黃酒釀造中的作用
    1.2 影響黃酒品質(zhì)的因素
        1.2.1 乙醇對(duì)酵母菌生長(zhǎng)發(fā)酵的影響
        1.2.2 黃酒中的氨基甲酸乙酯(EC)
    1.3 黃酒產(chǎn)業(yè)發(fā)展方向
        1.3.1 黃酒酵母菌株基因功能研究
        1.3.2 優(yōu)良菌株的篩選
    1.4 生物信息學(xué)分析
    1.5 本研究的目的、內(nèi)容以及意義
第2章 黃酒酵母一個(gè)新基因的功能分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)的背景及意義
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
        2.2.1 培養(yǎng)基
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)相關(guān)菌株及質(zhì)粒
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 生物信息學(xué)分析
        2.3.2 g5170 基因功能研究分析
        2.3.3 重組酵母菌株的構(gòu)建流程圖
        2.3.4 酵母菌的活化及小量基因組的提取
        2.3.5 目的基因g5170 的擴(kuò)增
        2.3.6 質(zhì)粒的提取
        2.3.7 目的基因g5170 和質(zhì)粒pYES2 的雙酶切
        2.3.8 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.9 大腸桿菌感受態(tài)的制備及重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.3.10 菌落PCR驗(yàn)證
        2.3.11 提取質(zhì)粒測(cè)序驗(yàn)證
        2.3.12 醋酸鋰介導(dǎo)的高效酵母轉(zhuǎn)化
        2.3.13 酵母重組子菌落PCR驗(yàn)證
        2.3.14 重組酵母菌株半乳糖誘導(dǎo)前后生長(zhǎng)動(dòng)力測(cè)定
        2.3.15 重組酵母菌株酒精脅迫環(huán)境下生長(zhǎng)動(dòng)力測(cè)定
        2.3.16 重組酵母菌株外源基因轉(zhuǎn)錄(RT-PCR)定性檢測(cè)
        2.3.17 重組酵母菌株外源蛋白表達(dá)(SDS)檢測(cè)
        2.3.18 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 重組酵母菌株的構(gòu)建結(jié)果
        2.4.2 重組酵母菌株半乳糖誘導(dǎo)前后生長(zhǎng)動(dòng)力
        2.4.3 重組酵母菌株酒精脅迫環(huán)境下生長(zhǎng)曲線
        2.4.4 重組酵母外源基因表達(dá)檢測(cè)(RT-PCR)
        2.4.5 基因表達(dá)量檢測(cè)(RNA-Seq)
        2.4.6 初步觀察重組酵母的蛋白表達(dá)
    2.5 本章小結(jié)
第3章 低產(chǎn)尿素酵母菌株的篩選及相關(guān)基因分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)背景及意義
    3.2 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
        3.2.1 主要培養(yǎng)基
        3.2.2 儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 酵母菌株的分離活化
        3.3.2 精氨酸利用培養(yǎng)
        3.3.3 酵母菌基因組DNA提取
        3.3.4 酵母菌cDNA的合成
        3.3.5 精氨酸代謝相關(guān)基因分析
        3.3.6 黃酒發(fā)酵實(shí)驗(yàn)
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 不同黃酒酵母菌株對(duì)精氨酸利用分析
        3.4.2 CAR1 基因相對(duì)表達(dá)量分析
        3.4.3 模擬黃酒發(fā)酵液中尿素、還原糖和酒精含量測(cè)定
    3.5 本章小結(jié)
第4章 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3188160