一、亞洲玉米螟轉(zhuǎn)錄組拼接注釋與細胞色素P450基因的初步分析細胞色素P450是超家族基因,催化至少60種不同的反應(yīng)。昆蟲P450s在降解殺蟲劑和植物次生物質(zhì)等外源物質(zhì)過程中起著關(guān)鍵作用。但由于玉米螟基因組信息不完善,我們對玉米螟中P450s基因的了解甚少。為了更好研究玉米螟中細胞色素P450基因的功能,首先搜索SRA已上傳的玉米螟的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),獲得8組數(shù)據(jù)后,送百邁克生物科技有限公司進行分析。共得到36.54Gb Clean Data,各樣品Q30堿基百分比均不小于87.24%,GC%含量平均值為49.74%。轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)飽和度檢驗顯示,檢測到的基因數(shù)目趨于飽和。組裝獲得59911條Unigene,序列總長度為44249132 bp,平均長度為738.58 bp,N50為1239 bp,組裝完整性較高;通過選擇BLAST參數(shù)E-value不大于1×10^-5和HMMER參數(shù)E-value不大于1×10^-10,最終獲得23441個有注釋信息Unigene。并且,轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進一步分析,獲得32個P450全長基因,進行了基因家族的克隆和命名。從獲得... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 飛蝗簡介
    1.2 玉米螟簡介
    1.3 細胞色素P450概述
        1.3.1 內(nèi)源代謝
        1.3.2 外源代謝
    1.4 細胞色素P450還原酶及其研究進展
    1.5 殺蟲劑與植物次生代謝物
    1.6 研究目的和意義
第二章 玉米螟轉(zhuǎn)錄組分析
    2.1 實驗原始數(shù)據(jù)、實驗材料和方法
        2.1.1 實驗原始數(shù)據(jù)來源
        2.1.2 轉(zhuǎn)錄組測序文庫評估
        2.1.3 轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)組裝
        2.1.4 Unigene功能注釋
        2.1.5 基因表達量分析
        2.1.6 供試?yán)ハx
        2.1.7 主要試劑盒儀器設(shè)備
        2.1.8 飼喂法處理,干擾亞洲玉米螟P450基因
    2.2 實驗結(jié)果
        2.2.1 測序文庫評估
        2.2.2 原始數(shù)據(jù)質(zhì)量評估
        2.2.3 轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)組裝
        2.2.4 Unigene功能注釋
        2.2.5 表達定量分析
        2.2.6 亞洲玉米螟的全長P450基因
        2.2.7 飼喂法處理亞洲玉米螟
    2.3 討論
第三章 亞洲玉米螟細胞色素P450還原酶基因的克隆與表達分析
    3.1 實驗材料和試劑
        3.1.1 供試?yán)ハx
        3.1.2 主要試劑盒儀器設(shè)備
        3.1.3 亞洲玉米螟細胞色素P450還原酶全長的克隆
        3.1.4 序列分析
        3.1.5 cDNA模板制備
        3.1.6 實時定量PCR檢測
    3.2 實驗結(jié)果與分析
        3.2.1 亞洲玉米螟OfCPR基因的克隆
        3.2.2 亞洲玉米螟OfCPR氨基酸序列分析
        3.2.3 OfCPR蛋白多序列對比與進化分析
        3.2.4 OfCPR基因差異表達分析
    3.3 討論
第四章 干擾飛蝗細胞色素P450還原酶基因/細胞色素P450基因影響了飛蝗對西維因的敏感性
    4.1 實驗材料和方法
        4.1.1 供試?yán)ハx
        4.1.2 相關(guān)試劑及儀器
        4.1.3 cDNA的合成和LmCPR的克隆
        4.1.4 LmCPR基因的生物信息學(xué)分析
        4.1.5 實時定量PCR檢測
        4.1.6 RNAi技術(shù)干擾LmCPR
        4.1.7 CPR酶活力檢測
        4.1.8 西維因檢測
        4.1.9 CYP450基因的引物設(shè)計
        4.1.10 PBO處理飛蝗三齡若蟲,CYP450酶活力測定
    4.2 實驗結(jié)果
        4.2.1 LmCPR基因的克隆與序列分析
        4.2.2 昆蟲CPRs間的進化分析
        4.2.3 LmCPR基因的表達分析
        4.2.4 RNAi技術(shù)沉默LmCPR基因
        4.2.5 沉默LmCPR基因后對西維因敏感性分析
        4.2.6 P450基因特征
        4.2.7 P450基因差異表達分析
        4.2.8 PBO處理后影響飛蝗對西維因的敏感性
        4.2.9 用西維因分別處理沉默Lm6HN1,Lm6HL1,Lm6HC1和Lm6HQ1的飛蝗
        4.2.10 不同濃度西維因?qū)m6HN1,Lm6HL1,Lm6HC1和Lm6HQ1四個基因的誘導(dǎo)表達
    4.3 討論
第五章 花椒毒素對飛蝗CYP450的誘導(dǎo)及其解毒機制研究
    5.1 實驗材料和方法
        5.1.1 供試?yán)ハx
        5.1.2 相關(guān)試劑
        5.1.3 CYP450基因和轉(zhuǎn)錄因子的引物設(shè)計
        5.1.4 花椒毒素處理飛蝗三齡若蟲
        5.1.5 RNAi技術(shù)干擾LmCYP
    5.2 實驗結(jié)果
        5.2.1 不同濃度花椒毒素對飛蝗P450的誘導(dǎo)表達
        5.2.2 Lm6FE1,Lm6HL1和Lm6FD1的解毒功能研究
        5.2.3 生理條件下,轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控CYP450基因的表達
        5.2.4 花椒毒素誘導(dǎo)下,轉(zhuǎn)錄因子CncC和Maf調(diào)控CYP6FE1、CYP6FD1和CYP6HL1基因的表達
        5.2.5 沉默轉(zhuǎn)錄因子CncC和Maf,飛蝗對花椒毒素的敏感性
    5.3 討論
參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡況及聯(lián)系方式


【參考文獻】：
期刊論文
[1]殺蟲劑發(fā)展史的簡述[J]. 葉萱.  世界農(nóng)藥. 2017(01)
[2]昆蟲對植物次生物質(zhì)的代謝適應(yīng)機制及其對昆蟲抗藥性的意義[J]. 陳澄宇,康志嬌,史雪巖,高希武.  昆蟲學(xué)報. 2015(10)
[3]殺蟲劑西維因毒性及雌激素活性進展研究[J]. 喬廣浩,劉欣.  環(huán)境科學(xué)與技術(shù). 2010(02)
[4]我國昆蟲抗藥性研究的現(xiàn)狀及展望[J]. 唐振華.  昆蟲知識. 2000(02)
[5]東亞飛蝗（Locusta migratoria manilensis Meyen）在中國的發(fā)生動態(tài)[J]. 馬世駿.  昆蟲學(xué)報. 1958(01)

碩士論文
[1]殺蟲劑及植物次生代謝物對飛蝗細胞色素P450基因的誘導(dǎo)表達[D]. 李亞紅.山西大學(xué) 2015



本文編號：3183028