基因?qū)胂到y(tǒng)較低的轉(zhuǎn)染效率限制了基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的治療效用,盡管病毒介導(dǎo)的載體系統(tǒng)可以具備相對較高的基因表達(dá)水平,但它在基因治療中插入或整合到染色體的位置是隨機(jī)的,有引起插入突變及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的潛在危險(xiǎn);非病毒載體系統(tǒng)的免疫原性較低,安全可靠,并適于大規(guī)模生產(chǎn),在外源基因短暫表達(dá)中具有優(yōu)勢,并廣泛應(yīng)用于各種DNA疫苗的研制,它的不足是體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低,靶向性差,基因表達(dá)時(shí)間短。綜上,采用生物安全性較好的非病毒方式,如何增強(qiáng)外源基因表達(dá),進(jìn)而延長基因治療的時(shí)間,受到人們越來越多的關(guān)注。另一方面,重組蛋白表達(dá)技術(shù)是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、功能,及篩選靶向藥物的有力工具,在基礎(chǔ)科學(xué)以及醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮了重要作用。截至目前,人們已經(jīng)研究開發(fā)出多種原核和真核表達(dá)系統(tǒng)用以生產(chǎn)重組蛋白。原核表達(dá)系統(tǒng)方便,便宜、周期短,但有些蛋白折疊不好,不帶有糖基化等修飾;而哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)——作為典型的真核表達(dá)系統(tǒng),主要用于制備分泌的重組蛋白。相較于其他表達(dá)系統(tǒng)的宿主,它具有最出色的蛋白質(zhì)折疊和二硫鍵形成能力,表達(dá)出的蛋白最接近天然蛋白,有利于蛋白結(jié)構(gòu)和功能研究,但也存在著產(chǎn)量低,培養(yǎng)成本較高的劣勢。因此,人們期望發(fā)明一種簡單高... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 基因治療研究概述
        1.1.1 基因治療
        1.1.2 載體導(dǎo)入系統(tǒng)
    1.2 重組蛋白的生產(chǎn)概述
        1.2.1 重組蛋白的生產(chǎn)
        1.2.2 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
    1.3 酵母免疫反應(yīng)概述
        1.3.1 重組釀酒酵母
        1.3.2 重組酵母介導(dǎo)的免疫反應(yīng)
    1.4 GAL4/UAS系統(tǒng)概述
        1.4.1 Gal4蛋白
        1.4.2 Gal4蛋白的結(jié)合序列
    1.5 GAL4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒
    1.6 研究目的與意義
第二章 GAL4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    2.2 材料方法
        2.2.1 主要材料
        2.2.2 Gal4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒的構(gòu)建
        2.2.3 Gal4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒增強(qiáng)效果檢測
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 Gal4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒的構(gòu)建
        2.3.2 HEK293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染和熒光觀察
        2.3.3 Gal4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒增強(qiáng)效果檢測
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 GAL4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒的優(yōu)化及穩(wěn)定性檢測
    3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    3.2 材料方法
        3.2.1 主要材料
        3.2.2 比較和優(yōu)化Gal4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒
        3.2.3 增強(qiáng)基因表達(dá)效果的比較
        3.2.4 增強(qiáng)基因表達(dá)穩(wěn)定性的檢測
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 比較和優(yōu)化Gal4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒的載體構(gòu)建
        3.3.2 Gal4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒工作有效性的載體構(gòu)建
        3.3.3 不同表達(dá)盒增強(qiáng)效果比較和工作有效性探究
        3.3.4 Gal4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒穩(wěn)定性檢測
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 GAL4/UAS系統(tǒng)表達(dá)盒在CHO細(xì)胞上的驗(yàn)證
    4.1 研究思路
    4.2 材料方法
        4.2.1 主要材料
        4.2.2 CHO細(xì)胞上檢測Luciferase基因的表達(dá)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染條件的摸索
        4.3.2 CHO細(xì)胞上檢測Luciferase基因的表達(dá)量
    4.4 討論
        4.4.1 CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.4.2 CHO細(xì)胞上檢測Luciferase基因表達(dá)量
    4.5 小結(jié)
結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]胞內(nèi)細(xì)菌性感染激活模式識(shí)別受體信號(hào)介導(dǎo)的宿主免疫應(yīng)答機(jī)制[D]. 陽大海.華東理工大學(xué) 2015
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碩士論文
[1]RNA模板介導(dǎo)同源重組修復(fù)的探討及不同CRISPR/Cas9系統(tǒng)的比較研究[D]. 韓芙蓉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[2]重組人紅細(xì)胞生成素二聚體融合蛋白的構(gòu)建、表達(dá)和純化工藝研究[D]. 有紅霞.吉林大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3169433