基因?qū)胂到y(tǒng)較低的轉(zhuǎn)染效率限制了基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的治療效用,盡管病毒介導的載體系統(tǒng)可以具備相對較高的基因表達水平,但它在基因治療中插入或整合到染色體的位置是隨機的,有引起插入突變及細胞惡性轉(zhuǎn)化的潛在危險;非病毒載體系統(tǒng)的免疫原性較低,安全可靠,并適于大規(guī)模生產(chǎn),在外源基因短暫表達中具有優(yōu)勢,并廣泛應用于各種DNA疫苗的研制,它的不足是體內(nèi)轉(zhuǎn)導效率低,靶向性差,基因表達時間短。綜上,采用生物安全性較好的非病毒方式,如何增強外源基因表達,進而延長基因治療的時間,受到人們越來越多的關(guān)注。另一方面,重組蛋白表達技術(shù)是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、功能,及篩選靶向藥物的有力工具,在基礎(chǔ)科學以及醫(yī)藥學領(lǐng)域發(fā)揮了重要作用。截至目前,人們已經(jīng)研究開發(fā)出多種原核和真核表達系統(tǒng)用以生產(chǎn)重組蛋白。原核表達系統(tǒng)方便,便宜、周期短,但有些蛋白折疊不好,不帶有糖基化等修飾;而哺乳動物表達系統(tǒng)——作為典型的真核表達系統(tǒng),主要用于制備分泌的重組蛋白。相較于其他表達系統(tǒng)的宿主,它具有最出色的蛋白質(zhì)折疊和二硫鍵形成能力,表達出的蛋白最接近天然蛋白,有利于蛋白結(jié)構(gòu)和功能研究,但也存在著產(chǎn)量低,培養(yǎng)成本較高的劣勢。因此,人們期望發(fā)明一種簡單高... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 基因治療研究概述
        1.1.1 基因治療
        1.1.2 載體導入系統(tǒng)
    1.2 重組蛋白的生產(chǎn)概述
        1.2.1 重組蛋白的生產(chǎn)
        1.2.2 哺乳動物細胞表達系統(tǒng)
    1.3 酵母免疫反應概述
        1.3.1 重組釀酒酵母
        1.3.2 重組酵母介導的免疫反應
    1.4 GAL4/UAS系統(tǒng)概述
        1.4.1 Gal4蛋白
        1.4.2 Gal4蛋白的結(jié)合序列
    1.5 GAL4/UAS系統(tǒng)表達盒
    1.6 研究目的與意義
第二章 GAL4/UAS系統(tǒng)表達盒的構(gòu)建
    2.1 實驗設(shè)計
    2.2 材料方法
        2.2.1 主要材料
        2.2.2 Gal4/UAS系統(tǒng)表達盒的構(gòu)建
        2.2.3 Gal4/UAS系統(tǒng)表達盒增強效果檢測
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 Gal4/UAS系統(tǒng)表達盒的構(gòu)建
        2.3.2 HEK293T細胞轉(zhuǎn)染和熒光觀察
        2.3.3 Gal4/UAS系統(tǒng)表達盒增強效果檢測
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 GAL4/UAS系統(tǒng)表達盒的優(yōu)化及穩(wěn)定性檢測
    3.1 實驗設(shè)計
    3.2 材料方法
        3.2.1 主要材料
        3.2.2 比較和優(yōu)化Gal4/UAS系統(tǒng)表達盒
        3.2.3 增強基因表達效果的比較
        3.2.4 增強基因表達穩(wěn)定性的檢測
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 比較和優(yōu)化Gal4/UAS系統(tǒng)表達盒的載體構(gòu)建
        3.3.2 Gal4/UAS系統(tǒng)表達盒工作有效性的載體構(gòu)建
        3.3.3 不同表達盒增強效果比較和工作有效性探究
        3.3.4 Gal4/UAS系統(tǒng)表達盒穩(wěn)定性檢測
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 GAL4/UAS系統(tǒng)表達盒在CHO細胞上的驗證
    4.1 研究思路
    4.2 材料方法
        4.2.1 主要材料
        4.2.2 CHO細胞上檢測Luciferase基因的表達
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 CHO細胞轉(zhuǎn)染條件的摸索
        4.3.2 CHO細胞上檢測Luciferase基因的表達量
    4.4 討論
        4.4.1 CHO細胞轉(zhuǎn)染
        4.4.2 CHO細胞上檢測Luciferase基因表達量
    4.5 小結(jié)
結(jié)論和創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
縮略詞
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]胞內(nèi)細菌性感染激活模式識別受體信號介導的宿主免疫應答機制[D]. 陽大海.華東理工大學 2015
[2]重組酵母調(diào)控腸道免疫細胞（CD11c+DCs）功能的機理和應用研究[D]. 張婷婷.西北農(nóng)林科技大學 2013

碩士論文
[1]RNA模板介導同源重組修復的探討及不同CRISPR/Cas9系統(tǒng)的比較研究[D]. 韓芙蓉.西北農(nóng)林科技大學 2016
[2]重組人紅細胞生成素二聚體融合蛋白的構(gòu)建、表達和純化工藝研究[D]. 有紅霞.吉林大學 2008



本文編號：3169433