目的:探索Nedd4L基因對大鼠肝星狀細胞TGF-β1/Smad信號通路的影響及意義。方法:1.質粒最佳作用濃度將不同濃度（50nmol/L、30nmol/L、10nmol/L、0nmol/L）帶熒光的陰性質粒pEGFP-N1或FAM-Negative siRNA借由脂質體轉染試劑LipofectamineTM 2000轉染入HSC-T6 24小時后,在倒置熒光顯微鏡下觀察各濃度組的轉染率即為帶綠色熒光細胞占總細胞的比例,明確質粒最佳轉染濃度。2.TGF-β1對HSC-T6中Nedd4L表達的影響首先用不同濃度TGF-β1（0 ng/ml、1 ng/ml、2.5 ng/ml、5 ng/ml）刺激HSC-T624小時后,用RT-PCR方法檢測Collagen-ⅠmRNA及Nedd4L mRNA的表達,以建立最佳體外肝纖維化模型;隨后選取最佳濃度TGF-β1刺激HSC-T6 0小時、12小時、24小時、48小時后,同樣用RT-PCR方法檢測Collagen-ⅠmRNA及Nedd4L mRNA的表達,以明確TGF-β1對HSC-T6中Nedd4L表達的影響。3.Nedd4L基因過表達對HSC... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
    1 材料
        1.1 細胞來源
        1.2 細胞培養(yǎng)材料
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器設備
        1.5 主要溶液及配制
    2 方法
        2.1 大鼠肝星狀細胞的復蘇與培養(yǎng)
        2.2 實驗分組
        2.3 脂質體轉染
        2.4 REAL-TIME PCR檢測NEDD4L、SMAD3、P-SMAD3、COLLAGEN-Ⅰ各MRNA的含量
        2.5 WESTERN BLOT檢測NEDD4L、SMAD3、P-SMAD3、COLLAGEN-Ⅰ蛋白的表達
    3 統(tǒng)計分析
結果
討論
存在問題和需要進一步研究的問題
參考文獻
附錄
綜述
    參考文獻
致謝
在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]新疆哈薩克族人神經(jīng)前體細胞表達發(fā)育調控樣蛋白4基因rs3865418多態(tài)性與中心性肥胖的相關性[J]. 王紅梅,洪靜,羅文利,常建航,姚曉光,李南方.  中國醫(yī)學科學院學報. 2011(05)
[2]神經(jīng)前體細胞表達發(fā)育調控樣蛋白4基因多態(tài)性與哈薩克族高血壓病的關聯(lián)研究[J]. 王紅梅,李南方,洪靜,姚曉光,羅文利,常建航.  中華心血管病雜志. 2010 (10)
[3]神經(jīng)前體細胞表達發(fā)育調控樣基因rs4149601多態(tài)性與新疆哈薩克族人群中心性肥胖的關聯(lián)研究[J]. 王紅梅,李南方,姚曉光,洪靜,羅文利,常建航.  中華醫(yī)學遺傳學雜志. 2010 (06)



本文編號：3152384