牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）是一種有囊膜的單鏈RNA病毒,屬于瘟病毒屬黃病毒科。BVDV在牛中引起許多疾病,包括腹瀉,粘膜病,持續(xù)感染,出血綜合征以及生殖和呼吸疾病,導(dǎo)致養(yǎng)牛業(yè)的巨大經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)于該病目前尚無(wú)有效的治療方法,因此加強(qiáng)對(duì)本病的研究就顯得尤為重要。MicroRNAs（miRNAs）是一類(lèi)小的非編碼RNA,其與多個(gè)靶mRNA的3’非編碼區(qū)（UTR）中的互補(bǔ)序列結(jié)合;盡管miRNA的序列短小,但其在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起重要作用�，F(xiàn)有越來(lái)越多的研究結(jié)果均表明miRNA與病毒感染密切相關(guān),從miRNA方向研究BVDV調(diào)控宿主的機(jī)制可為BVDV的防控提供理論依據(jù)。本試驗(yàn)以MDBK和家兔為宿主,通過(guò)設(shè)計(jì)炎癥反應(yīng)關(guān)鍵酶COX-2和炎癥因子如IL-8、MIP-3α、GRO-α的特異性引物,分別從MDBK、家兔脾臟組織和小腸上皮組織中分別擴(kuò)增目的片段,建立實(shí)時(shí)熒光相對(duì)定量PCR方法檢測(cè)感染前后COX-2和IL-8、MIP-3α、GRO-αmRNA的相對(duì)表達(dá)變化。結(jié)果表明在BVDV感染MDBK細(xì)胞后,COX-2和IL-8、GRO-αmRNA表達(dá)量均顯著高于未感染前（P<0.01）;當(dāng)BVDV... 

【文章來(lái)源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

miRNA形成示意圖

3 結(jié)果DV NADL 感染 MDBK 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察MDBK 細(xì)胞復(fù)蘇之后正常培養(yǎng)，設(shè)對(duì)照組和 BVDV 感染組。觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)果如K 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)并不改變，且營(yíng)養(yǎng)無(wú)細(xì)胞脫落與病變，見(jiàn)圖 4A；而 BVDV NADL 感染 MDBK 細(xì)胞后，細(xì)胞前 2h2h 之后細(xì)胞形態(tài)逐漸發(fā)生變化，細(xì)胞開(kāi)始變圓變形，在感染 16h 細(xì)胞之間形成空泡辨認(rèn)，并伴有細(xì)胞脫落和裂解，見(jiàn)圖 2B。

0M 1 2 3 4 5家兔前后炎癥因子的表達(dá)變化測(cè)定結(jié)鑒定結(jié)果錄和 PCR 擴(kuò)增，見(jiàn)圖 3，與預(yù)期條帶相符。條帶大小-8 為 212bp，MIP-3α 為 172bp，GRO-α 為 163bp。經(jīng)測(cè)序 GAPDH 大小為 248bp，COX-2 為 208bp，IL與預(yù)期結(jié)果一致。通過(guò) BLAST 發(fā)現(xiàn)測(cè)序所得序列與見(jiàn)圖 4 ，證明擴(kuò)增和回收的片段是目的基因片段


本文編號(hào)：3137158