油菜素內(nèi)酯（BR）是一類對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育有重要調(diào)節(jié)作用的甾醇類植物激素。OsDWF4是水稻調(diào)控BR生物合成的關(guān)鍵限速酶之一,而OsBZR1是BR信號(hào)傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,介導(dǎo)了 BR與多種不同信號(hào)通路的互作。本課題主要研究了不同啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的OsDWF4和OsBZR1過量表達(dá)對(duì)水稻產(chǎn)量和品質(zhì)等性狀的影響及其作用機(jī)制。期望本研究可幫助完善水稻的BR信號(hào)通路及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò),并為培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的水稻新品種提供重要依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1、以粳稻品種日本晴不同的組織和發(fā)育籽粒為研究材料分析OsDWF4和OsBZR1的表達(dá)。檢測(cè)結(jié)果顯示OsDWF4基因在水稻葉片中表達(dá)最高,在其他組織中的表達(dá)差異不明顯,而在發(fā)育種子中,OsDWF4在種子發(fā)育前期和中期（0-15DAF）表達(dá)水平基本平穩(wěn),在種子發(fā)育后期（15-20DAF）表達(dá)明顯上升。OsBZR1基因在水稻根中表達(dá)量最高,其次是葉鞘和莖稈,而在葉片和小苗中表達(dá)最低。在發(fā)育種子中,OsBZR1基因在種子發(fā)育初期（0DAF）表達(dá)水平最高,然后隨著種子的發(fā)育表達(dá)逐漸下降。2、將OsDWF4基因克隆到包含水稻胚乳特異性表達(dá)啟動(dòng)子Gt1或玉米組成型表達(dá)啟動(dòng)子U... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＢＲ的生物合成途徑〖１３１??Ｆｉｇｕｒｅ?１?ＢＲ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｐａｔｈｗａｙ??１．２?ＢＲ信號(hào)傳導(dǎo)通路??

?２１??片段進(jìn)行酶切。構(gòu)建至最終載體，連接載體后鑒定為陽性克隆的質(zhì)粒繼續(xù)連接??Ｃ７？／ＳＰｉ？／Ｑｗ９最終載體（如圖５），轉(zhuǎn)化Ｆａｓｔ－Ｔｌ感受態(tài)細(xì)胞，涂布帶有卡那霉素抗性的固??體ＬＢ平板，利用公共引物Ｔ７和正向引物兩端引物搭配鑒定菌落。使用Ｔ７引物進(jìn)行測(cè)??序。??＾?Ｑ?ＳＫ－ｇＲＮＡ?Ｉ?｜｜?Ｕ３?ｐｒｏＴｕｒｇｃｔ?ｓｇＲＮＡ?ｘｃａｆＴｏｌｉｌ?Ｔｉ?ｍｍ?ｉ?ｉ?１??巧９?｜?丨?Ｚ????Ｉ??，ｊ?＊?ｉ??ＬｌＴＴ?ｆ?§?ＴＯｒｔ??ｃｒＲＫＡ?ｉ＾－；???Ｎｊ??ＶａＭＶ?１??ｖ＇ＴＴｒＴＴｎｒ，?＾．３００＾９?Ｃａ．ｓ９?，ｆｒｔｎ，ｎａ，？ｒ?￣??Ｋｐｎｌ?Ｂｊｕｎｌｌ?Ｉ??圖５?５＾－ｇｍ４和／？Ｃ７Ｊ洲－載體結(jié)構(gòu)圖??Ｆｉｇｕｒｅ?５?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｄｉａｇｒａｍｓ?ｏｆ?ＳＫ－ｇＲＮＡ?ａｎｄ?ｐＣ１３００－Ｃａｓ９．??２．２．３亞細(xì)胞定位?ｉ??本實(shí)驗(yàn)通過ＰＣＲ方法擴(kuò)增獲得ａｓ５Ｚ／？／基因的ＣＤＳ?（去除終止密碼子），通過??Ｇａｔｅｗａｙ系統(tǒng)ＬＲ反應(yīng)連入包含ＧＦＰ基因的／７ＧＦ５５載體上，并測(cè)序驗(yàn)證。具體轉(zhuǎn)化及??觀察過程：挑取轉(zhuǎn)化為陽性的農(nóng)桿菌克�。ǎ牵郑常保埃本辏┯冢�?ｍＬ含有相應(yīng)抗生素的液??體ＬＢ中，２８°Ｃ搖床２５０ｒｐｍ培養(yǎng)至ＯＤ６〇〇＝１．４￣１．６，?ＯＤ６〇〇＝１．５為最佳。吸取所搖菌液??于新的５ｍＬ含有相應(yīng)抗生素的液體ＬＢ中

研究中對(duì)結(jié)實(shí)率、千粒重等其他主要產(chǎn)量性狀也做了考察。結(jié)果顯示，與野生型對(duì)照??相比，和ｐｔ／６／．＿．＿ＯｓＤｆＫＦ４轉(zhuǎn)基因水稻的結(jié)實(shí)率未表現(xiàn)出顯著差異，而千??粒重顯著升高（圖１１）。??Ａ?Ｂ??ｌｏｏ?１?１?？?？？?？?？？?？？??ｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌ??Ｙ８?Ｌｉｎｅ?１?Ｌｉｎｅ?２?Ｌｉｎｅ?３?Ｌｉｎｅ?１?Ｌｉｎｅ?２?Ｌｉｎｅ?３?Ｙ８?Ｌｉｎｅ?１?Ｌｉｎｅ?２?Ｌｉｎｅ?３?Ｌｉｎｅ?Ｉ?Ｌｍｃ?２?Ｌｉｎｅ?３??ｐＧｔｌ：：ＯａＤＷＦ４?ｐＵｂｉ：：ＯｓＤＷＦ４?ｐＣｔｌ：：ＯｓＤＷＦ４?ｐＵｂｉ：：ＯｓＤＷＦ４??圖１１分析ｐＧＯ：．ａｓＤＦ／Ｗ和ｐｔ／６／：：〇ｙＤＷ７Ｗ水稻的結(jié)實(shí)率和千粒重??Ｆｉｇｕｒｅ?１１?Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｓｅｅｄ?ｓｅｔｔｉｎｇ?ｒａｔｅ?ａｎｄ?１０００－ｇｒａｉｎ?ｗｅｉｇｈｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＯｓＤＷＦ４?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｌｉｎｅｓ．??Ａ：結(jié)實(shí)率；Ｂ：千粒重。利用Ｔ－Ｔｅｓｔ進(jìn)行顯著性差異分析。＊＊表示極顯著差異（Ｐ＜０．０１），?＊表示顯著差??異（０．０１＜Ｐ＜０．０５）。??（Ａ）?ｓｅｅｄ?ｓｅｔｔｉｎｇ?ｒａｔｅ；?（Ｂ）?１０００－ｇｒａｉｎ?ｗｅｉｇｈｔ．?Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｕｓｉｎｇ?Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ?Ｔ－Ｔｅｓｔ．?Ｄｏｕｂｌｅ??ａｓｔｅｒｉｓｋｓ?ｄｅｎｏｔｅ?ａ?ｈｉｇｈｌｙ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｕｓｉｎｇ?Ｓｔｕｄｅｎｔ＇ｓ?Ｔ－Ｔｅｓｔ（Ｐ?＜?０．０１）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]優(yōu)質(zhì)與高產(chǎn)水稻品種稻米品質(zhì)和淀粉RVA譜特征值差異初探[J]. 魯超,龔克成,李育娟,周麗瑤,范軍.  上海農(nóng)業(yè)科技. 2019(01)
[2]水稻萌發(fā)過程中油菜素內(nèi)酯影響淀粉代謝的效應(yīng)及其機(jī)制[J]. 李錢峰,余佳雯,魯軍,熊敏,張昌泉,劉巧泉.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(04)
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