農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡調(diào)控機(jī)制的研究可為害蟲(chóng)綜合防治提供新的視角和理論立足點(diǎn),近年來(lái)越來(lái)越受到重視。gadd45基因具有阻滯細(xì)胞生長(zhǎng)以及誘導(dǎo)DNA損傷的功能,是響應(yīng)外源脅迫,調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡的關(guān)鍵因子之一,但是對(duì)于重大農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)小菜蛾,其編碼的GADD45蛋白在DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡等一系列生理過(guò)程中的作用及其調(diào)控機(jī)制目前尚不明確。有鑒于此,本課題在成功克隆出小菜蛾gadd45基因的基礎(chǔ)上,利用qPCR分析其在不同齡期和不同脅迫源如熱激、紫外輻射和藥劑誘導(dǎo)下的表達(dá)量變化;同時(shí),構(gòu)建其原核及真核的表達(dá)載體,對(duì)其進(jìn)行原核和真核的體外誘導(dǎo)表達(dá),并利用相關(guān)預(yù)測(cè)軟件在蛋白水平對(duì)其進(jìn)行表征;此外,通過(guò)構(gòu)建小菜gadd45基因的dsRNA表達(dá)載體,利用qPCR分析飼喂法介導(dǎo)的RNA干擾試驗(yàn)后,gadd45基因及其相關(guān)基因的表達(dá)水平,以初步分析小菜蛾gadd45基因的功能。主要研究結(jié)果如下:根據(jù)GenBank及小菜蛾基因組數(shù)據(jù),設(shè)計(jì)gadd45基因開(kāi)放閱讀框的特異引物,采用PCR技術(shù)在小菜蛾成蟲(chóng)cDNA中克隆得到gadd45基因的編碼區(qū)序列,經(jīng)測(cè)序可知該基因編碼區(qū)序列長(zhǎng)度有495 bp... 

【文章來(lái)源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

小菜蛾總RNAM：12KDNAMarker；1：小菜蛾總RNA

3結(jié)果與分析243.2.2GADD45氨基酸序列比對(duì)及進(jìn)化樹(shù)分析比較分析了小菜蛾與家蠶(B.mori)、柑橘鳳蝶(P.xuthus)，斜紋夜蛾(S.litura)，粉紋夜蛾(T.ni)，大蠟螟(G.mellonella)，玉米螟(O.furnacalis)，棉鈴蟲(chóng)(H.armigera)，赤擬谷盜(T.castaneum)、光肩星天牛(A.glabripennis)，黑腹果蠅(D.melanogaster)，埃及伊蚊(A.aegypti)等11種昆蟲(chóng)的GADD45氨基酸序列，結(jié)果顯示它們之間具有較高的同源性(圖3-3)，小菜蛾GADD45與同為鱗翅目的玉米螟的一致性最高，達(dá)76.8%；與棉鈴蟲(chóng)的同源性為74.4%，而與其它目昆蟲(chóng)，如果蠅、埃及伊蚊、赤擬谷盜和光肩星天牛的一致性較低。將小菜蛾GADD45氨基酸序列與部分已知的其他生物GADD45氨基酸序列比對(duì)后構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)（圖3-4），結(jié)果表明，昆蟲(chóng)GADD45具有較高的同源性，小菜蛾GADD45和柑橘鳳蝶和玉米螟的GADD45之間同源性較之與家蠶GADD45之間的同源性高�？傮w而言，小菜蛾GADD45與同為鱗翅目昆蟲(chóng)GADD45之間的同源性比其他目的昆蟲(chóng)同源性要高，這與它們?cè)诜诸惖匚簧系挠H緣關(guān)系遠(yuǎn)近是一致的，但昆蟲(chóng)GADD45與脊索動(dòng)物之間同源性低，這也符合它們?cè)诜诸惖匚簧舷喔糨^遠(yuǎn)的規(guī)律。圖3-3小菜蛾GADD45氨基酸序列與其他已知昆蟲(chóng)GADD45氨基酸序列比較Fig.3-3AminoacidsequencecomparisonofP.xylostellaGADD45withotherknowninsectsGADD45P.xylostella：小菜蛾；B.mori：家蠶；P.xuthus：柑橘鳳蝶；S.litura：斜紋夜蛾；T.ni：粉紋夜蛾；G.mellonella：大蠟螟；O.furnacalis：玉米螟；H.armigera：棉鈴蟲(chóng)；T.castaneum：赤擬谷盜；A.glabripennis：光肩星天牛；D.melanogaster：黑腹果蠅；A.aegypti：埃及伊蚊

小菜蛾gadd45基因的克隆及其功能的初步研究25圖3-4小菜蛾與其他物種的GADD45氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)Fig.3-4PhylogenetictreeofGADD45aminoacidsequenceofP.xylostellaandotherspeciesOs1triniafurnacalis：玉米螟；Bombyxmori：家蠶；Helicoverpaarmigera：棉鈴蟲(chóng)；Spodopteralitura：斜紋夜蛾；Manducasexta：煙草天蛾；Galleriamellonella：大蠟螟；Trichoplusiani：粉紋夜蛾；Papilioxuthus：柑橘鳳蝶；Plutellaxylostella：小菜蛾；Drosophilamelanogaster：黑腹果蠅；Drosophilasuzukii：斑翅果蠅；Aedesaegypti：埃及伊蚊；Aedesalbopictus：白紋伊蚊；Diabroticavirgifera：玉米根蟲(chóng)；Triboliumcastaneum：赤擬谷盜；Leptinotarsadecemlineata：馬鈴薯甲蟲(chóng)；Anoplophoraglabripennis：光肩星天牛；Oryctolaguscuniculus：家兔；Gallusgallus：原雞；Musmusculus：小鼠；Rattusnorvegicus：大鼠；Homosapiens：智人；Macacamulatta：恒河猴；注：“”為本研究克隆所得小菜蛾gadd45基因編碼的氨基酸序列Note：""istheaminoacidsequenceencodedbygadd45geneclonedinthisstudy3.2.3小菜蛾gadd45基因的表達(dá)特征分析3.2.3.1定量PCR引物的特異性檢測(cè)及標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)Huggett等[64]對(duì)qPCR引物質(zhì)量的要求，將模板稀釋成四個(gè)濃度梯度進(jìn)行qPCR反應(yīng)，檢測(cè)gadd45基因與內(nèi)參基因actin定量PCR所用引物。如圖3-5至3-8所示，定量引物qPCR后所得擴(kuò)增曲線平滑，溶解峰單一且明顯。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]農(nóng)藥與紫外脅迫對(duì)白蛾周氏嚙小蜂小分子熱激蛋白sHSP12.2基因表達(dá)的影響[J]. 范偉健,相偉芳,王靜,白鵬華,潘麗娜,楊藝新,朱耿平,李敏.  林業(yè)科學(xué). 2019(02)
[2]小菜蛾生物學(xué)特性及生活世代發(fā)生規(guī)律研究[J]. 趙嘉德,楊彥斌.  農(nóng)村實(shí)用技術(shù). 2018(01)
[3]喜樹(shù)堿誘導(dǎo)甜菜夜蛾細(xì)胞凋亡線粒體途徑的MPTP依賴性[J]. 任小雙,張?zhí)m,張燕寧,毛連綱,蔣紅云.  昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2017(10)
[4]小菜蛾生物學(xué)特性及防治研究進(jìn)展[J]. 常曉麗,袁永達(dá),張?zhí)熹?滕海媛,王冬生.  上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2017(05)
[5]桿狀病毒AcMNPV介導(dǎo)BmK IT的表達(dá)促進(jìn)草地夜蛾卵巢Sf9細(xì)胞凋亡及病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制（英文）[J]. 付月君,趙潔,梁愛(ài)華,胡風(fēng)云.  生理學(xué)報(bào). 2015(03)
[6]小菜蛾危害特點(diǎn)及防治方法[J]. 潘志梅.  現(xiàn)代農(nóng)村科技. 2013(14)
[7]喜樹(shù)堿誘導(dǎo)的草地貪夜蛾Sf9細(xì)胞凋亡[J]. 王文祥,鐘國(guó)華,胡美英,黃勁飛,葛萃萃.  昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2011(08)
[8]殺蟲(chóng)劑對(duì)昆蟲(chóng)的亞致死效應(yīng)[J]. 王小藝.  世界農(nóng)藥. 2004(03)
[9]蔬菜害蟲(chóng)小菜蛾的生物學(xué)研究[J]. 李云壽,羅萬(wàn)春,李云春.  植物醫(yī)生. 1996(03)
[10]小菜蛾生物學(xué)研究——生活習(xí)性的觀察[J]. 柯禮道,方菊蓮.  植物保護(hù)學(xué)報(bào). 1980(03)

碩士論文
[1]周期蛋白A2對(duì)功能性下頜前伸中髁突軟骨細(xì)胞周期的調(diào)控作用[D]. 馬素偉.河北醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]小菜蛾精氨酸激酶基因dsRNA在大腸桿菌中的表達(dá)及其效應(yīng)[D]. 徐秀鳳.福建農(nóng)林大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3130151