發(fā)布時間：2021-04-08 19:59

　　膽紅素氧化酶（Bilirubin oxidase）是一種含銅多酚氧化酶,能夠?qū)⒛懠t素氧化為膽綠素和一些性質(zhì)不是很清楚的其他物質(zhì)。從微生物和植物中分離純化出來的膽紅素氧化酶,能氧化多種漆酶的多種底物,在環(huán)境保護(hù)領(lǐng)域顯示出比漆酶更大的應(yīng)用潛能。然而異源的膽紅素氧化酶基因在植物中的異源表達(dá)卻鮮有報(bào)道。本文通過對疣孢漆斑菌（Myrothecium verrucaria）的膽紅素氧化酶基因進(jìn)行改造后,成功實(shí)現(xiàn)了在擬南芥中的異源表達(dá),并完成了對表達(dá)蛋白的酶學(xué)特性及對染料脫色能力的研究,并為以植物作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)重組膽紅素氧化酶研究奠定了基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1、按照植物偏愛密碼、RNA穩(wěn)定性原則、蛋白翻譯N端原則等重新設(shè)計(jì)疣孢漆斑菌（Myrothecium verrucaria）的膽紅素氧化酶基因,并對優(yōu)化后的Mv BODI基因進(jìn)行了人工合成。同時,在Mv BODI基因的5’端引入了蛋白分泌信號肽序列,便于實(shí)現(xiàn)在擬南芥中的分泌表達(dá)。將合成基因插入接到植物載體p CAMBIA1301,使該基因表達(dá)由強(qiáng)組成型啟動子Ca MV35S控制。2、利用農(nóng)桿菌蘸花法將Mv BODI基因?qū)霐M南芥中,得... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

膽紅素在生物體內(nèi)的形成過程

ATTTA 等 PolyA 加尾信號和多個連續(xù)的 A+T 和 G+C 序列，使 G+C 的比例為40~60%，以防止內(nèi)含子切割序列，減少兩級結(jié)構(gòu) hairpins 在基因內(nèi)部的出現(xiàn)，避免 2、3 位 TA 和 GC 雙核苷酸的出現(xiàn)，因?yàn)?GC 在植物出現(xiàn)易造成甲基化。2.4.2 植物表達(dá)載體的構(gòu)建將改造的 Mv BOD，CaMV35S 啟動子，Nos 終止子進(jìn)行酶切后，依次插入植物表達(dá)載體 pCAMBIA1301，，構(gòu)建重組載體 pCAMBIA1301-BOD，每插入一個單元進(jìn)行酶切鑒定和序列測定，獲得 Mv BOD 基因植物分泌表達(dá)載體pCAMBIA1301-BOD。其結(jié)果如下：

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文182.4.3MvBODI序列分析用DNAMAN比對基因MvBOD和MvBODI，如圖2-3所示，二者相似度很高為80.1%（如圖2-3）。新合成的膽紅素氧化酶基因（MvBODI）與MvBOD基因編碼的氨基酸序列幾乎完全相同，其相似度為98.96%（圖2-4）。圖2-2生物公司合成的MvBODI基因的DNA檢測Fig.2-2DNADetectionofMvBODIgenesynthetizedbybiologicalcompany

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]澳大利亞平臍蠕孢霉膽紅素氧化酶的產(chǎn)生、特性及應(yīng)用研究[D]. 黃世臣.東北林業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：3126171