目的構建特殊富含AT序列結合蛋白2 （Satb2）基因慢病毒表達載體并通過感染293T細胞檢測目的基因的表達。方法采用PCR技術擴增目的基因Satb2,并在目的基因的上下游分別添加酶切位點PacⅠ和AscⅠ,將其PCR產(chǎn)物和目的載體用PacⅠ和AscⅠ分別進行雙酶切,通過T4DNA ligase連接酶切后的PCR產(chǎn)物及目的載體,構建pLenti6.3-Satb2-IRES-EGFP慢病毒表達載體,通過菌液PCR、酶切及測序鑒定其結果;將陽性克隆質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒Mix共轉染293T細胞,收集、濃縮病毒液并測定其濃度;將重組病毒液感染293T細胞,觀察其熒光表達情況,通過q PCR檢測目的基因表達。結果菌液PCR結果得到一條約2 202 bp的亮帶,與目的基因大小相符;重組載體經(jīng)過雙酶切得到一條9.1 kb大片段及一條2 202 bp小片段;通過測序驗證重組載體中Satb2基因序列與GenBank報道的序列完全一致,表明慢病毒表達載體構建成功。經(jīng)過包裝,重組慢病毒滴度達到7.9×107ifu/mL,該病毒液感染293T細胞后可觀察到大量熒光,感染率約為70%,通過qPCR檢測結果顯示實驗組S... 

【文章來源】：海南醫(yī)學. 2020,31(23)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

p Lenti6.3-Satb2-IRES-EGFP重組載體菌落PCR鑒定

p Lenti6.3-Satb2-IRES-EGFP酶切鑒定

將菌落PCR和酶切鑒定結果均呈陽性的重組慢病毒載體送測序，并進行基因序列比對，結果顯示，Satb2基因序列與Gen Bank報道的序列完全一致，見圖3。2.4 慢病毒包裝及滴度測定結果

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]廣泛型侵襲性牙周炎基礎治療前后牙槽骨變化的CBCT評價[J]. 孫曉娟,許春姣,池毓坦,李冬梅,王宏峰,王苗苗,張文瑞.  牙體牙髓牙周病學雜志. 2017(11)
[3]慢性牙周炎患者基礎治療前后齦溝液中瘦素水平變化的研究[J]. 段立榮,賈樹芳,麻婷婷,王麗.  臨床口腔醫(yī)學雜志. 2016(05)



本文編號：3118883