微孢子蟲（Microsporidia）是寄生范圍廣的單細(xì)胞真核生物,家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）是家蠶主要的傳染性疾病微粒子病的病原體,給蠶業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。家蠶微孢子蟲體內(nèi)沒(méi)有三羧酸循環(huán),但具有糖酵解（Glycolysis）途徑。糖酵解過(guò)程中有三個(gè)關(guān)鍵反應(yīng),分別是葡萄糖在己糖激酶的作用下轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖、6-磷酸果糖在磷酸果糖激酶的作用下轉(zhuǎn)化為1,6-二磷酸果糖以及磷酸烯醇式丙酮酸在丙酮酸激酶（Pyruvate kinase）的作用下轉(zhuǎn)化為丙酮酸,這三步均是不可逆反應(yīng)。剪接因子（Splicing factor）是真核生物中RNA編輯的重要元件,經(jīng)過(guò)剪接因子剪接可以產(chǎn)生許多具有功能的、帶有編碼信息的mRNA,對(duì)于生物體最基本的生命活動(dòng)至關(guān)重要,同時(shí)對(duì)于真核生物基因正確表達(dá)相應(yīng)蛋白也是不可或缺的一步。本課題對(duì)家蠶微孢子蟲丙酮酸激酶基因和剪接因子基因及二者所編碼的蛋白質(zhì)做了研究,得到如下結(jié)果:（1）通過(guò)檢索發(fā)現(xiàn)家蠶微孢子蟲的丙酮酸激酶共有兩個(gè)亞型,每個(gè)亞型各有3個(gè)拷貝。系統(tǒng)發(fā)育樹和多序列比對(duì)結(jié)果的表明,家蠶微孢子蟲丙酮酸激酶M2亞型的其中兩個(gè)拷貝（EOB11679... 

【文章來(lái)源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 微孢子蟲
    1.2 微孢子蟲糖酵解途徑研究現(xiàn)狀
    1.3 剪接因子研究現(xiàn)狀
    1.4 研究意義
    1.5 技術(shù)路線
第2章 家蠶微孢子蟲丙酮酸激酶的基因克隆與轉(zhuǎn)錄活性分析
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 主要試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 生物信息學(xué)分析
        2.2.2 NbPK-2基因克隆
        2.2.3 NbPK-2轉(zhuǎn)錄活性分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 生物信息學(xué)分析結(jié)果
        2.3.2 NbPK-2基因克隆結(jié)果
        2.3.3 q-PCR測(cè)定微孢子蟲感染家蠶后不同時(shí)間段的NbPK-2 基因轉(zhuǎn)錄水平
    2.4 討論
第3章 家蠶微孢子蟲的剪接因子的基因克隆與轉(zhuǎn)錄活性分析
    3.1 材料與試劑
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 主要試劑配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 生物信息學(xué)分析
        3.2.2 NbSF-1基因克隆
        3.2.3 NbSF-1轉(zhuǎn)錄活性分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 生物信息學(xué)分析結(jié)果
        3.3.2 NbSF-1基因克隆結(jié)果
        3.3.3 q-PCR測(cè)定微孢子蟲感染家蠶后不同時(shí)間段的NbSF-1 基因轉(zhuǎn)錄水平
    3.4 討論
第4章 家蠶微孢子蟲剪接因子的原核表達(dá)以及多克隆抗體的制備
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.3 主要試劑配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 構(gòu)建重組表達(dá)載體
        4.2.2 小試表達(dá)目的蛋白
        4.2.3 SDS-PAGE檢測(cè)蛋白表達(dá)
        4.2.4 大量表達(dá)并純化目的蛋白
        4.2.5 制備多克隆抗體
        4.2.6 家蠶微孢子蟲的總蛋白的提取
    4.3 結(jié)果與分析
    4.4 討論
第5章 家蠶微孢子蟲剪接因子的亞細(xì)胞定位
    5.1 材料及試劑
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.3 主要試劑配制
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)
    5.3 結(jié)果與分析
    5.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1 糖酵解模式圖
    附錄2 pMD-19T載體質(zhì)粒圖譜
    附錄3 pET-28a載體質(zhì)粒圖譜
    附錄4 家蠶微孢子蟲丙酮酸激酶序列比對(duì)分析圖
    附錄5 家蠶微孢子蟲剪接因子序列比對(duì)分析圖
    附錄6 實(shí)驗(yàn)所用儀器匯總
    注釋
攻讀碩士期間已發(fā)表論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]數(shù)據(jù)分析之單因素方差分析[J]. 牛凱.  產(chǎn)業(yè)與科技論壇. 2019(02)
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博士論文
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[2]一種大豆固有無(wú)序蛋白-GmASR蛋白的多重保護(hù)功能研究[D]. 李冉輝.東北師范大學(xué) 2013
[3]柞蠶微孢子蟲檢測(cè)及感染柞蠶中腸轉(zhuǎn)錄組及蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 姜義仁.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
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[5]家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）功能基因組研究[D]. 林立鵬.西南大學(xué) 2012
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碩士論文
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[3]克雷伯肺炎桿菌葡萄糖氧化途徑的研究[D]. 王德信.燕山大學(xué) 2015
[4]家蠶正常蠶卵與感染微孢子蟲蠶卵的差異蛋白質(zhì)研究[D]. 姜春寶.重慶師范大學(xué) 2012
[5]全原子編碼方式預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的溶劑可及性[D]. 張曉朦.大連理工大學(xué) 2011
[6]家蠶微孢子蟲與菜粉蝶微孢子蟲的形態(tài)學(xué)與系統(tǒng)發(fā)育研究[D]. 徐小芳.江蘇科技大學(xué) 2011
[7]家蠶微粒子病免疫學(xué)快速檢測(cè)試紙條的研制[D]. 蘆琨.西南大學(xué) 2009
[8]家蠶微孢子蟲在昆蟲細(xì)胞中的增殖及CQ1株系建立的研究[D]. 賀偉偉.西南大學(xué) 2009
[9]家蠶微孢子蟲CQ1分離株的遺傳多態(tài)性研究[D]. 申子剛.西南大學(xué) 2008
[10]野油菜黃單胞菌EMP途徑相關(guān)基因的突變分析[D]. 胡江如.廣西大學(xué) 2007



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