發(fā)布時(shí)間：2021-03-30 18:39

　　植物在生長(zhǎng)過(guò)程中,會(huì)遭遇各類(lèi)逆境的影響。為了更好的生存,植物進(jìn)化出各種應(yīng)答機(jī)制,響應(yīng)不利環(huán)境。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）級(jí)聯(lián)途徑在調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育、激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、應(yīng)答生物或非生物脅迫等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。在本研究中,利用小麥莖尖和模式植物煙草葉片做外植體,獲得轉(zhuǎn)基因植株,對(duì)小麥激酶基因TaMAPKK1、TaMAPKK3應(yīng)答各類(lèi)逆境的功能和分子機(jī)制進(jìn)行了研究。主要研究結(jié)果如下。1、通過(guò)NCBI獲取供試基因TaMAPKK1和TaMA PKK3的核苷酸序列以及編碼氨基酸序列,分析氨基酸水平進(jìn)化特征。研究表明,TaMAPKK1、TaMAPKK3編碼蛋白具有MAPKKs蛋白典型功能。2、分析供試基因在不同逆境下的表達(dá)特征。結(jié)果表明,與正常培養(yǎng)材料相比,TaMAPKK1在小麥氮素缺乏時(shí),表達(dá)量上升,而在低磷脅迫、模擬干旱和鹽分下差異不明顯;TaMAPKK3在小麥磷素供應(yīng)不足的情況時(shí)表達(dá)豐度上升,在低氮脅迫、模擬干旱以及鹽分下表達(dá)差異較小。3、利用DNA重組技術(shù),分別將TaMAPKK1、TaMAPKK3的正義和反義序列融合至雙元表達(dá)載體啟動(dòng)子的下游,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方... 

【文章來(lái)源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３?ＭＡＰＫ級(jí)聯(lián)途徑調(diào)控?cái)M南芥生長(zhǎng)、發(fā)育??Ｆｉｇｕｒｅ?３?ＭＡＰＫ．?ｃａｓｃａｄｅ?ｐａｔｈｗａｙ??

?小麥激酶基因八?分子特征和抵御逆境功能研究???使用ＮＣＢ丨在線工具對(duì)ＴａＭＡＰＫＫｌ保守域進(jìn)行預(yù)測(cè)（圖７），發(fā)現(xiàn)該蛋白含有一般ＭＡＰＩＣＫｓ??保守結(jié)構(gòu)域（７１－３３０ａａ），內(nèi)含有激酶活化位點(diǎn)（７５－２５９ａａ）、ＡＴＰ結(jié)合位點(diǎn)（７８－２０５ａａ）、多肽鏈結(jié)合??區(qū)（８０－２５９ａａ）。??Ｉ?．．．．?ｖ?Ｊｆ?．．．．?．．．．?３ｒ?ｔ??？？＇＊？?ｊｍ?Ａ??龍ａｉ—Ａ４ＪＢＬ???（ｍ－?．ｉｔ？?一．．．．．．??▲＿一＿ｍＭｔ?ｔｍ一－▲??ｂｉｎｔｆｉｎｔ?？ｌｉ？?Ａ?????．??．．．．．．?▲?▲??？ｃＶｌＭｉｉｏｎ?ｉ姻ｍＡ??Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｈｉｔｓ?＿ＭＨＩＭＩＭＩｉｌＭｌｌＢ８ｇａａｉｌＫ＾ａＥｒＬｒｇｇａｆａ＿ｉ＾ｌＭｌｌ�。。�？Ｓ＿＿ｌｉＢＢ—ｉａｉｉ—Ｍ??Ｓｕｂｆａｍｉｌｉｅｓ?ＰＫｏ＿ｌｉｋｅ?ｓｕｐ？ｒｆａ？ｉｌｙ??圖７ＴａＭＡＰＫＫ丨保守域預(yù)測(cè)??Ｆｉｇｕｒｅ?７?ＴａＭ?ＡＰＫＫ１?ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ?ｄｏｍａｉｎ?ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ??通過(guò)ＮＣＢ丨仵線Ｔ．具ＢＬＡＳＴ分析ＴａＭＡＰＫＫｌ在氨甚酸水平上進(jìn)化特征（圖８），結(jié)果表明，??ＴａＭＡＰＫＫｌ?Ｌｊ節(jié)節(jié)左（Ａ＿．ｓｃ／；（７）、尺去（／／．ｖｕ／ｇａｒｅ）等種屬的同源蛋白呈序列相似特征。表明??與編碼Ｉ．述丨源蛋丨＇丨相應(yīng)站閃具有相似的進(jìn)化途徑。??７〇??Ｐ．?ｈａｌｌｉｉ?ＭＡＰＫＫ１?（ＸＰ?０２５８１８２０２）??７５??Ｓ．?ｉｔａｌｉｃａ?ＭＡＰＫＫ１?（ＸＰ?００４９６９７９２）???Ｓ．?ｈｙｂｒｉ

?河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文???３．３．２?的表達(dá)載體構(gòu)建??利用ＤＮＡ重組技術(shù)，將正義序列融合至ｐＣＡＭＢＩＡ３３０１啟動(dòng)子下游，構(gòu)建融合??正義序列的ｒａＭ４ＰＡＸ３－ｐＣＡＭＢＩＡ３３０１表達(dá)載體，并進(jìn)行酶切驗(yàn)證。重組質(zhì)粒的構(gòu)建過(guò)程如圖１６??所示。??ＩＩＩＥＩＩ??圖丨６?ＴＴ／ＭＷＡＵ正義表達(dá)載體的構(gòu)建??Ｆｉｇｕｒｅ?１６?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＴａＭＡＰＫＫ３?ｓｅｎｓｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ??沈：ａ為汾ｉｉ：義序列ｐｃｒ擴(kuò)増產(chǎn)物；ｂ為尺幻ｉｉ：義汴列１廠ｒ?ａ沐迮彳幻??釵沐連接／ｎ雙ｉ＂ｉ丨Ｄ為：個(gè)：親質(zhì)粒ｐＣＡＭＢ丨Ａ３３０１?ｆ以乂剛切ｎ；〖：如砂丨．）ｉ／ｒ粒抒??液?ＰＣＲ?結(jié)果；Ｍ?為?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?２０００：??利用ＤＮＡ重組技術(shù)，將Ｋ／Ｍ／ｉＰＵ反義宇列融合至ｐＣＡＭＢ丨Ａ３３０１啟動(dòng)子下游，構(gòu)建融合??反義序列的ｒｒｔＭ＾ＷＣＯ－ｐＣＡＭＢＩＡ３３０１表達(dá)載體，ｊｆ？進(jìn)行酶叻驗(yàn)證。重組質(zhì)粒的構(gòu)建過(guò)程如圖１７??所示。??ｍｍ??圖１７?ｒ？Ｍ４ＰＡ：ｔ？反義表達(dá)載體的構(gòu)建??Ｆｉｇｕｒｅ?１７?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?〇＼＇?ＴａＭＡＰＫＫ３?ａｎｔｉｓｅｎｓｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ??注：Ａ為視人３反夂序列ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物；Ｂ為汾：似伙以反義序列與Ｔ載體連接后的重組質(zhì)粒；Ｃ？海ｒａ．Ｖ／．４／＞／ＷＪ反義序列與Ｔ??我體連接后雙酶Ｉ刀：丨）為貨質(zhì)粒ｐＣＡＭＢＩＡ３３０ｌ經(jīng)雙酶Ｉ刀后：丨為起＇ｆｌ質(zhì)粒經(jīng)雙＿１?刀驗(yàn)Ｉ正：丨為??液?ＰＣＲ?結(jié)果：Ｍ?為?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ?２０００ｃ??２６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小麥脫落酸受體基因TaPYR1介導(dǎo)植株抵御干旱逆境功能研究[J]. 韓樂(lè),杜萍萍,肖凱.  作物學(xué)報(bào). 2020(06)
[2]論土壤植物營(yíng)養(yǎng)學(xué)與農(nóng)業(yè)持續(xù)發(fā)展[J]. 柴苗苗.  南方農(nóng)機(jī). 2019(18)
[3]亞麻MAPK基因克隆及鹽堿脅迫下的表達(dá)分析[J]. 于瑩,陳宏宇,程莉莉,趙東升,袁紅梅,吳廣文,關(guān)鳳芝.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(03)
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[5]植物MAPK C族基因的研究進(jìn)展[J]. 朱斌,梁穎.  生物技術(shù)通報(bào). 2012(11)
[6]干旱脅迫對(duì)文冠果幼苗生長(zhǎng)和生理生化特征的影響[J]. 謝志玉,張文輝,劉新成.  西北植物學(xué)報(bào). 2010(05)
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[8]鹽脅迫對(duì)扁桃砧木葉片SOD、POD和CAT活性的影響[J]. 買(mǎi)合木提·卡熱,克熱木·伊力,吾甫爾·巴拉提.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2005(06)
[9]植物蛋白質(zhì)激酶和MAPK信號(hào)傳遞系統(tǒng)[J]. 劉小麗.  河北師范大學(xué)學(xué)報(bào). 2001(03)

博士論文
[1]擬南芥MKK9-MPK3/MPK6參與的MAPK級(jí)聯(lián)信號(hào)系統(tǒng)調(diào)控磷吸收的機(jī)理研究[D]. 雷蕾.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]玉米D族促分裂原活化蛋白激酶MAPK基因ZmMPK17的分離與功能分析[D]. 潘教文.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]生長(zhǎng)素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白OsPIN2對(duì)水稻株型、根系生長(zhǎng)和磷素營(yíng)養(yǎng)的調(diào)控作用[D]. 陳贏男.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]小麥耐逆基因TaCaM1和TaMAPK3分子特征及功能研究[D]. 王卓.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]小麥細(xì)胞分裂素響應(yīng)因子TaARR193、鈣調(diào)素TaCaM12、TaPC及TaNF-YB3;1分子特征和耐逆鑒定[D]. 楊夢(mèng)雅.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3109961