將Taqman微流控芯片技術應用于實時熒光PCR平臺的轉基因玉米17種品系高通量檢測。在一次PCR擴增過程中,以2個玉米內源基因（hmgA基因、adh1基因）和1個上樣控制基因（18S基因）為內參照,可同時完成17種轉基因玉米品系（TC1507、NK603、MON87640、MON863、MON810、MIR162、GA21、DAS40278、BT176、BT11、98140、59122、3272、MON89034、MIR604、MON88017、T25）的單孔單重擴增的并行檢測,檢出限可達10～20 copies。本方法特異性強,靈敏度高,與"金標準"單一的實時熒光PCR方法檢測結果完全吻合,具有可多樣品、多靶標平行檢測的優(yōu)勢,為轉基因產品多品系混雜鑒定檢測提供了高效、快速的方法。采用本方法,從16批進境的實用玉米中檢出9批轉基因玉米樣品,且發(fā)現(xiàn)其中不同程度的混雜含有1～8種品系。本方法可用于口岸進境實用農產品中多品系混雜轉基因的高通量檢測。 

【文章來源】：分析化學. 2020,48(11)北大核心EISCICSCD

【文章頁數(shù)】：12 頁

【部分圖文】：

Taqman微流控芯片檢測17種轉基因玉米品系示意圖

為了驗證Taqman微流控芯片方法的準確性,采用本研究建立的檢測體系,對進境的16批次實用玉米樣品進行檢測,同時以采用“金標準”單一的qPCR方法的結果進行對照,結果如圖2所示。16批次實用玉米樣品中,9批次樣品檢出含有轉基因玉米成分,其中8批次樣品混雜有多種轉基因玉米品系。由圖2可見,#1玉米樣品僅含有1個外源重組品系T25;#5玉米樣品含有2個外源重組品系MIR604、MON88017;#11玉米樣品含有3個外源重組品系Bt11、GA21、MIR604;#10玉米樣品含有6個外源重組品系Bt11、NK603、MIR604、MON88017、MON89034、MON810;#12玉米樣品含有6個外源重組品系NK603、TC1507、59122、MON88017、MON89034、MON810;#14玉米樣品含有7個外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON810;#3玉米樣品含有8個外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON89034、MON810;#4玉米樣品含有8個外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON89034、MON810;#13玉米樣品含有8個外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON89034、MON810。Taqman微流控芯片方法的部分檢測結果見圖3。結果表明,Taqman微流控芯片方法的檢測結果與實時熒光PCR方法結果完全一致,因此,建立的Taqman微流控芯片方法特異性良好,能夠滿足對口岸進境實用玉米中轉基因玉米品系的高效并行快速檢測需求。Taqman微流控芯片方法與單一的qPCR方法相比,操作簡單,僅需加入一次DNA模板的預混液即可完成多靶標的檢測,極大地提高了檢測效率,降低了檢測試劑用量;與多重PCR擴增相比,單孔單重擴增,可避免樣品間相互干擾,具有更高的檢測靈敏度。Taqman微流控芯片的不足之處是芯片制造成本較高,單孔的檢測成本約是普通實時熒光PCR的8倍。圖3 進境實用玉米樣品#10 (A)、#11 (B)和#14 (C)的Taqman微流控芯片實時熒光PCR擴增結果圖

圖2 16批次進境實用玉米樣品Taqman微流控芯片檢測結果匯總在ISAAA已獲批準的238個轉基因玉米品系名錄中[6],有192個是多種重組性狀雜交的復合品系。目前,很多復合品系轉基因作物尚未獲得我國生物安全性審批許可。本研究在一份樣品進境實用玉米樣品中同時檢出1～8種外源重組品系,這可能是多個單一品系混雜,也有可能是幾個復合品系混雜造成的。如#11玉米樣品可能是Bt11 × MIR604 × GA21復合品系,而# 3玉米樣品則可能是Bt11 × 59122 × MIR604 × TC1507、MON89034 × NK603、MON89034 × 59122、MON89034 × 59122 × MON88017、MON810 × MON88017、MON810 × NK603 × MIR604等多種復合品系的混雜,存在生物安全性風險。目前,還未見轉基因作物復合品系的鑒定方法,因而,未來可以利用Taqman微流控芯片技術的多靶標同時并行檢測的特點,進一步研究建立轉基因作物復合品系鑒定方法。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3095736