將Taqman微流控芯片技術(shù)應(yīng)用于實時熒光PCR平臺的轉(zhuǎn)基因玉米17種品系高通量檢測。在一次PCR擴增過程中,以2個玉米內(nèi)源基因（hmgA基因、adh1基因）和1個上樣控制基因（18S基因）為內(nèi)參照,可同時完成17種轉(zhuǎn)基因玉米品系（TC1507、NK603、MON87640、MON863、MON810、MIR162、GA21、DAS40278、BT176、BT11、98140、59122、3272、MON89034、MIR604、MON88017、T25）的單孔單重擴增的并行檢測,檢出限可達10～20 copies。本方法特異性強,靈敏度高,與"金標準"單一的實時熒光PCR方法檢測結(jié)果完全吻合,具有可多樣品、多靶標平行檢測的優(yōu)勢,為轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品多品系混雜鑒定檢測提供了高效、快速的方法。采用本方法,從16批進境的實用玉米中檢出9批轉(zhuǎn)基因玉米樣品,且發(fā)現(xiàn)其中不同程度的混雜含有1～8種品系。本方法可用于口岸進境實用農(nóng)產(chǎn)品中多品系混雜轉(zhuǎn)基因的高通量檢測。 

【文章來源】：分析化學. 2020,48(11)北大核心EISCICSCD

【文章頁數(shù)】：12 頁

【部分圖文】：

Taqman微流控芯片檢測17種轉(zhuǎn)基因玉米品系示意圖

為了驗證Taqman微流控芯片方法的準確性,采用本研究建立的檢測體系,對進境的16批次實用玉米樣品進行檢測,同時以采用“金標準”單一的qPCR方法的結(jié)果進行對照,結(jié)果如圖2所示。16批次實用玉米樣品中,9批次樣品檢出含有轉(zhuǎn)基因玉米成分,其中8批次樣品混雜有多種轉(zhuǎn)基因玉米品系。由圖2可見,#1玉米樣品僅含有1個外源重組品系T25;#5玉米樣品含有2個外源重組品系MIR604、MON88017;#11玉米樣品含有3個外源重組品系Bt11、GA21、MIR604;#10玉米樣品含有6個外源重組品系Bt11、NK603、MIR604、MON88017、MON89034、MON810;#12玉米樣品含有6個外源重組品系NK603、TC1507、59122、MON88017、MON89034、MON810;#14玉米樣品含有7個外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON810;#3玉米樣品含有8個外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON89034、MON810;#4玉米樣品含有8個外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON89034、MON810;#13玉米樣品含有8個外源重組品系Bt11、NK603、TC1507、59122、MIR604、MON88017、MON89034、MON810。Taqman微流控芯片方法的部分檢測結(jié)果見圖3。結(jié)果表明,Taqman微流控芯片方法的檢測結(jié)果與實時熒光PCR方法結(jié)果完全一致,因此,建立的Taqman微流控芯片方法特異性良好,能夠滿足對口岸進境實用玉米中轉(zhuǎn)基因玉米品系的高效并行快速檢測需求。Taqman微流控芯片方法與單一的qPCR方法相比,操作簡單,僅需加入一次DNA模板的預(yù)混液即可完成多靶標的檢測,極大地提高了檢測效率,降低了檢測試劑用量;與多重PCR擴增相比,單孔單重擴增,可避免樣品間相互干擾,具有更高的檢測靈敏度。Taqman微流控芯片的不足之處是芯片制造成本較高,單孔的檢測成本約是普通實時熒光PCR的8倍。圖3 進境實用玉米樣品#10 (A)、#11 (B)和#14 (C)的Taqman微流控芯片實時熒光PCR擴增結(jié)果圖

圖2 16批次進境實用玉米樣品Taqman微流控芯片檢測結(jié)果匯總在ISAAA已獲批準的238個轉(zhuǎn)基因玉米品系名錄中[6],有192個是多種重組性狀雜交的復(fù)合品系。目前,很多復(fù)合品系轉(zhuǎn)基因作物尚未獲得我國生物安全性審批許可。本研究在一份樣品進境實用玉米樣品中同時檢出1～8種外源重組品系,這可能是多個單一品系混雜,也有可能是幾個復(fù)合品系混雜造成的。如#11玉米樣品可能是Bt11 × MIR604 × GA21復(fù)合品系,而# 3玉米樣品則可能是Bt11 × 59122 × MIR604 × TC1507、MON89034 × NK603、MON89034 × 59122、MON89034 × 59122 × MON88017、MON810 × MON88017、MON810 × NK603 × MIR604等多種復(fù)合品系的混雜,存在生物安全性風險。目前,還未見轉(zhuǎn)基因作物復(fù)合品系的鑒定方法,因而,未來可以利用Taqman微流控芯片技術(shù)的多靶標同時并行檢測的特點,進一步研究建立轉(zhuǎn)基因作物復(fù)合品系鑒定方法。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3095736