發(fā)布時間：2021-03-16 03:32

　　CRISPR/Cas9技術廣泛應用于基因敲除,利用敲入包含熒光蛋白和目標基因的片段,有助于早期篩選實驗動物。長鏈脂肪酸延長酶5 （elongation of very long chain fatty acids 5, Elovl5）是魚類調控高不飽和脂肪酸合成的關鍵酶之一。為在斑馬魚（Danio rerio）研究鯉（Cyprinus carpio） Elovl5活性,本研究構建包含Tol2序列、斑馬魚短鏈肌球蛋白2基因（myosin light chain 2, Mylz2）啟動子、紅色熒光蛋白基因（red fluorescence gene, DsRed2）、斑馬魚Elovl5啟動子、鯉Elovl5基因、2A剪切肽和綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）的載體,擴增獲得一段長7.5 kb的片段。利用CRISPR/Cas9方法,將此片段敲入斑馬魚基因組。敲入成功的斑馬魚在受精72 h后開始于肌肉顯紅色熒光。對利用紅色熒光篩選敲入成功的斑馬魚,進一步用PCR擴增DsRed2予以確證。在存活斑馬魚中,基因敲入陽性率為28.7%。相... 

【文章來源】：農業(yè)生物技術學報. 2020,28(07)北大核心

【文章頁數】：12 頁

【部分圖文】：

陰性對照質粒(A)和實驗質粒(B)示意圖

野生組紅色熒光蛋白PCR擴增Figure 4 PCR amplification of DsRed2 i

Tol2陰性對照組紅色熒光蛋白PCR擴增


本文編號：3085329