蘿藦是蘿藦科蘿藦屬的多年生草質(zhì)藤本植物,在中國(guó)具有廣泛的分布,常見于南瓜、大豆和玉米等重要經(jīng)濟(jì)作物的種植區(qū)。蘿藦作為中藥食用,具有清熱解毒、治療勞損、蛇咬、咳嗽等作用,小分子提取物有抗腫瘤效果,多糖能改善機(jī)體的免疫力。黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）是雀麥花葉病毒科黃瓜花葉病毒屬的模式種,具有廣泛的寄主和極強(qiáng)的變異能力,由多種媒介昆蟲傳播,在世界范圍內(nèi)危害巨大。我們于2016年在南瓜地里發(fā)現(xiàn)了表現(xiàn)嚴(yán)重花葉癥狀的蘿藦,疑似感染了病毒病,為防范病株蘿藦可能帶來的疾病傳播,有必要對(duì)其病原進(jìn)行鑒定。此外,學(xué)者在原生質(zhì)體水平上發(fā)現(xiàn)CMV RNA3基因間隔區(qū)（Intergenic region,IGR）具有亞基因組RNA4的核心啟動(dòng)子及起始（+）RNA3合成的元件,但在植物體水平上還沒有相關(guān)的研究,所以我們?cè)谥参矬w水平上,開展了病毒系統(tǒng)侵染過程中IGR相關(guān)功能的研究。1.一個(gè)黃瓜花葉病毒新寄主的鑒定首先提取蘿藦病葉的雙鏈RNA（dsRNA）和病葉粗汁液,分別進(jìn)行PAGE電泳和生物學(xué)接種。結(jié)果顯示,摩擦接種的本氏煙在接種后3天,葉片開始輕微地卷曲并表現(xiàn)斑駁,說明該病... 

【文章來源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 黃瓜花葉病毒研究現(xiàn)狀
        1.2.1 黃瓜花葉病毒的危害及利用
        1.2.2 黃瓜花葉病毒的粒子形態(tài)和基因組特征
        1.2.3 黃瓜花葉病毒的癥狀表現(xiàn)
        1.2.4 黃瓜花葉病毒的株系劃分
        1.2.5 黃瓜花葉病毒的防控策略
    1.3 黃瓜花葉病毒基因間隔區(qū)的研究進(jìn)展
        1.3.1 正鏈RNA病毒非編碼區(qū)序列的功能簡(jiǎn)述
        1.3.2 基因間隔區(qū)與亞基因組RNA4 的合成
    1.4 病毒樣癥狀植株的病原鑒定方法
        1.4.1 已知病毒的檢測(cè)方法
        1.4.2 未知病毒的檢測(cè)方法
    1.5 研究目的及意義
    1.6 研究?jī)?nèi)容
第2章 一個(gè)黃瓜花葉病毒新寄主的發(fā)現(xiàn)
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 主要試劑配方
        2.2.3 主要儀器設(shè)備和生物信息學(xué)軟件
        2.2.4 摩擦接種實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 dsRNA的提取和進(jìn)一步純化
        2.2.6 dsRNA的聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）和銀染
        2.2.7 dsRNA的 DOP-PCR擴(kuò)增
        2.2.8 DOP-PCR產(chǎn)物的克隆和序列鑒定
        2.2.9 黃瓜花葉病毒蘿藦分離物的全基因組序列擴(kuò)增
        2.2.10 RT-PCR檢測(cè)
        2.2.11 進(jìn)化樹的構(gòu)建
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 摩擦接種
        2.3.2 蘿藦葉中提取的dsRNA的PAGE電泳
        2.3.3 dsRNA的 DOP-PCR擴(kuò)增和測(cè)序分析
        2.3.4 黃瓜花葉病毒蘿藦分離物的全基因組序列擴(kuò)增
        2.3.5 RT-PCR
        2.3.6 進(jìn)化樹的構(gòu)建
    2.4 討論
第3章 CMV-Fny RNA3 基因間隔區(qū)的功能
    3.1 前言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 重要試劑的配制
        3.2.3 近RNA4 轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的預(yù)測(cè)
        3.2.4 突變體表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.5 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        3.2.6農(nóng)桿菌注射接種實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 總蛋白的SDS-PAGE
        3.2.8 外殼蛋白的Western blot檢測(cè)
        3.2.9 RNA3和RNA4的Northern blot檢測(cè)
        3.2.10 半定量RT-PCR
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 突變體表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.2 轉(zhuǎn)化野生型RNA3 和缺失突變體的農(nóng)桿菌的鑒定
        3.3.3 農(nóng)桿菌注射接種本氏煙的癥狀觀察
        3.3.4 外殼蛋白的Western blot檢測(cè)
        3.3.5 探針的制備
        3.3.6 Northern blot檢測(cè)結(jié)果
        3.3.7 半定量RT-PCR
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1 ：CMV-Met全基因組序列擴(kuò)增的引物設(shè)計(jì)示意圖
    附錄2 ：分離膠和濃縮膠的配方
    附錄3 ：中英文縮略表
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]未知植物病毒分子生物學(xué)檢測(cè)方法的研究現(xiàn)狀[J]. 趙娜,苗艷梅,趙敏.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2019(01)
[2]植物病毒互作研究及基因編輯技術(shù)在抗病育種中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 楊一舟,李魏,易圖永,李峰.  生物技術(shù)通報(bào). 2018(08)
[3]農(nóng)藥潛在靶標(biāo)黃瓜花葉病毒外殼蛋白結(jié)構(gòu)的研究進(jìn)展[J]. 康錦欣,陳凱,高迪,王冬梅,李向陽.  農(nóng)藥. 2018(06)
[4]黃瓜花葉病毒致病性研究進(jìn)展[J]. 邱艷紅,王超楠,朱水芳.  生物技術(shù)通報(bào). 2017(09)
[5]植物病毒檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J]. 陶源,吳興泉.  分子植物育種. 2017(07)
[6]以黃瓜花葉病毒為載體表達(dá)綠色熒光蛋白[J]. 盧冉,常發(fā)光,杜志游,廖乾生.  浙江理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(06)
[7]植物轉(zhuǎn)基因抗性策略研究進(jìn)展[J]. 葉英林.  湖南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(10)
[8]植物抗病毒基因工程研究進(jìn)展[J]. 牙庫甫江·阿西木,阿斯古麗·伊斯馬伊力,王韻婧,劉玉樂.  生物工程學(xué)報(bào). 2015(06)
[9]黃瓜花葉病毒研究進(jìn)展[J]. 王達(dá)新,郭剛,殷曉敏,李嘉,曾會(huì)才.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2013(03)
[10]植物病毒檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展分析[J]. 張京宣,曹秀芬,宋濤,紀(jì)瑛.  北京農(nóng)業(yè). 2011(30)

碩士論文
[1]利用弱病毒載體表達(dá)PvSR2基因降低煙草植株重金屬鎘含量的研究[D]. 王強(qiáng).湖南人文科技學(xué)院 2016
[2]黃瓜花葉病毒生物學(xué)特性及分子變異研究[D]. 程朝玲.石河子大學(xué) 2013
[3]干擾黃瓜花葉病毒（CMV）人工MicroRNAs的構(gòu)建及其遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 沈?qū)毭?湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[4]黃淮和長(zhǎng)江中下游地區(qū)大豆花葉病毒（SMV）株系鑒定、抗源篩選及抗性遺傳的研究[D]. 王修強(qiáng).南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2000



本文編號(hào)：3081368