蘿藦是蘿藦科蘿藦屬的多年生草質藤本植物,在中國具有廣泛的分布,常見于南瓜、大豆和玉米等重要經濟作物的種植區(qū)。蘿藦作為中藥食用,具有清熱解毒、治療勞損、蛇咬、咳嗽等作用,小分子提取物有抗腫瘤效果,多糖能改善機體的免疫力。黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）是雀麥花葉病毒科黃瓜花葉病毒屬的模式種,具有廣泛的寄主和極強的變異能力,由多種媒介昆蟲傳播,在世界范圍內危害巨大。我們于2016年在南瓜地里發(fā)現了表現嚴重花葉癥狀的蘿藦,疑似感染了病毒病,為防范病株蘿藦可能帶來的疾病傳播,有必要對其病原進行鑒定。此外,學者在原生質體水平上發(fā)現CMV RNA3基因間隔區(qū)（Intergenic region,IGR）具有亞基因組RNA4的核心啟動子及起始（+）RNA3合成的元件,但在植物體水平上還沒有相關的研究,所以我們在植物體水平上,開展了病毒系統(tǒng)侵染過程中IGR相關功能的研究。1.一個黃瓜花葉病毒新寄主的鑒定首先提取蘿藦病葉的雙鏈RNA（dsRNA）和病葉粗汁液,分別進行PAGE電泳和生物學接種。結果顯示,摩擦接種的本氏煙在接種后3天,葉片開始輕微地卷曲并表現斑駁,說明該病... 

【文章來源】：江蘇科技大學江蘇省

【文章頁數】：78 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 黃瓜花葉病毒研究現狀
        1.2.1 黃瓜花葉病毒的危害及利用
        1.2.2 黃瓜花葉病毒的粒子形態(tài)和基因組特征
        1.2.3 黃瓜花葉病毒的癥狀表現
        1.2.4 黃瓜花葉病毒的株系劃分
        1.2.5 黃瓜花葉病毒的防控策略
    1.3 黃瓜花葉病毒基因間隔區(qū)的研究進展
        1.3.1 正鏈RNA病毒非編碼區(qū)序列的功能簡述
        1.3.2 基因間隔區(qū)與亞基因組RNA4 的合成
    1.4 病毒樣癥狀植株的病原鑒定方法
        1.4.1 已知病毒的檢測方法
        1.4.2 未知病毒的檢測方法
    1.5 研究目的及意義
    1.6 研究內容
第2章 一個黃瓜花葉病毒新寄主的發(fā)現
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 主要試劑配方
        2.2.3 主要儀器設備和生物信息學軟件
        2.2.4 摩擦接種實驗
        2.2.5 dsRNA的提取和進一步純化
        2.2.6 dsRNA的聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）和銀染
        2.2.7 dsRNA的 DOP-PCR擴增
        2.2.8 DOP-PCR產物的克隆和序列鑒定
        2.2.9 黃瓜花葉病毒蘿藦分離物的全基因組序列擴增
        2.2.10 RT-PCR檢測
        2.2.11 進化樹的構建
    2.3 結果
        2.3.1 摩擦接種
        2.3.2 蘿藦葉中提取的dsRNA的PAGE電泳
        2.3.3 dsRNA的 DOP-PCR擴增和測序分析
        2.3.4 黃瓜花葉病毒蘿藦分離物的全基因組序列擴增
        2.3.5 RT-PCR
        2.3.6 進化樹的構建
    2.4 討論
第3章 CMV-Fny RNA3 基因間隔區(qū)的功能
    3.1 前言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 重要試劑的配制
        3.2.3 近RNA4 轉錄起始位點的預測
        3.2.4 突變體表達載體的構建
        3.2.5 轉化農桿菌
        3.2.6農桿菌注射接種實驗
        3.2.7 總蛋白的SDS-PAGE
        3.2.8 外殼蛋白的Western blot檢測
        3.2.9 RNA3和RNA4的Northern blot檢測
        3.2.10 半定量RT-PCR
    3.3 結果
        3.3.1 突變體表達載體的構建
        3.3.2 轉化野生型RNA3 和缺失突變體的農桿菌的鑒定
        3.3.3 農桿菌注射接種本氏煙的癥狀觀察
        3.3.4 外殼蛋白的Western blot檢測
        3.3.5 探針的制備
        3.3.6 Northern blot檢測結果
        3.3.7 半定量RT-PCR
    3.4 討論
結論
參考文獻
附錄
    附錄1 ：CMV-Met全基因組序列擴增的引物設計示意圖
    附錄2 ：分離膠和濃縮膠的配方
    附錄3 ：中英文縮略表
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]利用弱病毒載體表達PvSR2基因降低煙草植株重金屬鎘含量的研究[D]. 王強.湖南人文科技學院 2016
[2]黃瓜花葉病毒生物學特性及分子變異研究[D]. 程朝玲.石河子大學 2013
[3]干擾黃瓜花葉病毒（CMV）人工MicroRNAs的構建及其遺傳轉化[D]. 沈寶明.湖南農業(yè)大學 2011
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本文編號：3081368