本文關鍵詞：蛋雞感染基因Ⅶd亞型NDV后輸卵管組織中病毒分布和Toll樣受體表達及炎性細胞浸潤研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽類的一種重要傳染病。新城疫不僅能引起感染雞的死亡,還導致蛋雞產(chǎn)蛋量下降,畸形蛋、軟殼蛋及沙殼蛋增多,表明雞生殖道也是NDV的靶組織。流行病學的研究表明,在過去十年里,基因Ⅶ型新城疫病毒是包括中國在內亞洲雞和鵝中暴發(fā)的主要基因型。近些年,大部分研究致力于基因ⅦNDV對免疫器官的損傷,但有關NDV感染蛋雞輸卵管病理損傷的研究很少。研究輸卵管的局部免疫,尤其是天然免疫在基因Ⅶd亞型NDV感染后的作用,對于NDV感染導致蛋雞輸卵管功能障礙的致病機制研究至關重要。本研究采用滴鼻和點眼的方法,用基因Ⅶd亞型NDV人工感染40周齡蛋雞,觀察蛋雞的臨床癥狀及輸卵管組織損傷;通過構建熒光定量PCR方法,檢測不同感染時間輸卵管各部分的病毒復制水平;HN蛋白免疫熒光染色觀察病毒浸染輸卵管細胞的類型;Real-time RT-PCR檢測模式識別受體Toll樣受體和MDA5的表達情況;以及不同感染時間膨大部CD3+CD4+和CD3+CD8α+淋巴細胞浸潤情況。試驗結果如下:1.基因Ⅶd亞型NDV人工感染非免健康蛋雞。感染后分別在第1 d、3 d、5 d、7 d、9 d、11 d、15 d頸部放血處死5只蛋雞。按輸卵管的傘部、膨大部、峽部、子宮部和陰道部取材。建立了NDV M基因real-time RT-PCR的標準曲線,相關系數(shù)達0.9979。參照建立的標準曲線,real-time RT-PCR檢測了輸卵管不同部位的病毒載量,發(fā)現(xiàn)輸卵管5個部位均能檢測到NDV,且在第5 d病毒載量最高,膨大部病毒載量達8918.6 copies/μL,子宮部達2934.6 copies/μL。NDV HN蛋白染色在感染雞的輸卵管5個部位都為陽性,且固有層細胞和黏膜層細胞均受到病毒的侵染。2.HE染色發(fā)現(xiàn)蛋雞感染基因Ⅶd亞型NDV后,輸卵管組織膨大部和子宮部出現(xiàn)嚴重的病理變化。膨大部的腺體出現(xiàn)充血出血,甚至腺體開始溶解,黏膜層開始變薄。子宮部的腔上皮管狀腺水腫,固有層淋巴細胞浸潤,黏膜上皮細胞出現(xiàn)壞死,脫落。用熒光定量方法檢測NDV感染蛋雞后輸卵管膨大部和子宮部的天然免疫模式識別受TLR3/7/21和MDA5基因mRNA在感染后不同時間的表達變化,結果發(fā)現(xiàn)在膨大部和子宮部都呈現(xiàn)出上調的趨勢,其中膨大部TLR3/7/21 mRNA表達在蛋雞感染后第5 d達到峰值,升高的倍數(shù)分別達42.6,98.9和27.1倍。3.免疫熒光染色觀察CD3+CD4+和CD3+CD8α+淋巴細胞在輸卵管膨大部浸潤情況。結果表明,NDV感染組CD3+CD4+和CD3+CD8α+淋巴細胞在膨大部明顯多于健康對照組,CD3+CD8α+和CD3+CD4+淋巴細胞在感染第1 d后開始增多,分別在感染后第3 d和第5 d達到最多。CD3+CD4+和CD3+CD8α+淋巴細胞主要分布在膨大部的固有層和黏膜上皮。CD4+主要分布在固有層,CD8α+主要分布在黏膜上皮,而且CD8α+比CD4+更能滲透到黏膜上皮的底部。綜上所述,蛋雞感染基因Ⅶd亞型NDV后,病毒能夠侵染輸卵管不同部位復制,引起輸卵管發(fā)生嚴重病理損傷。本研究結果為揭示NDV感染導致產(chǎn)蛋雞輸卵管功能障礙和產(chǎn)蛋下降提供了一定的理論依據(jù)。
【關鍵詞】：基因Ⅶd亞型NDV 輸卵管組織 Toll樣受體 淋巴細胞浸潤 產(chǎn)蛋雞
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.31
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 文獻綜述12-21
• 第一章 家禽對新城疫病毒的免疫反應研究進展12-21
• 1.1 新城疫病毒的概述12
• 1.2 NDV的一般生物學特性12-14
• 1.2.1 NDV的分類12-13
• 1.2.2 理化特性13
• 1.2.3 血凝活性和神經(jīng)氨酸酶活性13
• 1.2.4 NDV基因組結構及主要編碼蛋白13-14
• 1.3 NDV的致病機理14
• 1.3.1 致病性的分子基礎14
• 1.3.2 強毒株的出現(xiàn)14
• 1.4 家禽對NDV免疫反應14-19
• 1.4.1 天然免疫反應15-17
• 1.4.1.1 模式識別受體15-16
• 1.4.1.2 天然免疫因子16-17
• 1.4.2 體液免疫17-18
• 1.4.3 細胞免疫18-19
• 1.5 雞輸卵管結構與功能19-20
• 1.6 本研究目的意義20-21
• 試驗研究21-41
• 第二章 蛋雞感染基因VIId NDV后輸卵管組織中病毒載量及分布研究21-32
• 2.1 材料21-22
• 2.1.1 毒株21
• 2.1.2 試驗動物21
• 2.1.3 主要試劑21-22
• 2.1.4 主要儀器22
• 2.2 方法22-26
• 2.2.1 病毒增殖22-23
• 2.2.2 測定病毒的EID_(50)23
• 2.2.3 蛋雞人工感染基因VIId NDV及臨床癥狀觀察23
• 2.2.4 NDV M基因real-time RT-PCR標準曲線的建立23-25
• 2.2.4.1 引物的設計及合成23
• 2.2.4.2 陽性重組質粒的制備23-25
• 2.2.4.3 標準曲線的建立25
• 2.2.5 基因VIId NDV感染蛋雞輸卵管組織中不同部位病毒載量的檢測25-26
• 2.2.5.1 輸卵管部位總RNA的提取25
• 2.2.5.2 cDNA的合成25
• 2.2.5.3 Real-time RT-PCR25
• 2.2.5.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析25-26
• 2.2.6 免疫熒光染色檢測NDV感染蛋雞輸卵管組織中HN蛋白26
• 2.2.6.1 石蠟切片的制作26
• 2.2.6.2 HN蛋白的熒光染色26
• 2.3 結果26-30
• 2.3.1 基因VIId NDV感染蛋雞臨床癥狀及病變觀察26-27
• 2.3.2 NDV M基因標準曲線的建立27-29
• 2.3.2.1 基因VIId NDV M基因RT-PCR擴增結果27
• 2.3.2.2 基因VIId型NDV M基因的克隆27-28
• 2.3.2.4 標準曲線的建立28-29
• 2.3.3 蛋雞輸卵管不同部位中NDV病毒載量的測定29
• 2.3.4 NDV病毒HN蛋白在輸卵管5個部位的分布情況29-30
• 2.4 討論30-31
• 2.5 小結31-32
• 第三章 蛋雞感染基因VIId NDV后輸卵管組織中Toll樣受體表達及炎性細胞的浸潤研究32-41
• 3.1 材料32-33
• 3.1.1 毒株和試驗動物32
• 3.1.2 主要試劑32-33
• 3.2 方法33-34
• 3.2.1 NDV感染蛋雞輸卵管膨大部和子宮部病理組織學檢測33
• 3.2.2 Real-time RT-PCR檢測Toll樣受體及MDA5基因的表達33
• 3.2.2.1 Real-time RT-PCR33
• 3.2.2.2 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析33
• 3.2.3 直接免疫熒光檢測CD3CD4和CD3CD8淋巴細胞的浸潤33-34
• 3.2.3.1 結果的判定34
• 3.3 結果34-39
• 3.3.1 感染蛋雞輸卵管膨大部和子宮部病變情況34-35
• 3.3.2 Toll樣受體和MDA5基因在輸卵管膨大部和子宮部表達變化35-36
• 3.3.3 CD~(3+)CD~(4+)和CD~(3+)CD8α~+淋巴細胞在NDV感染雞輸卵管膨大部的分布36-39
• 3.4 討論39-40
• 3.5 小結40-41
• 結論41-42
• 參考文獻42-48
• 附錄48-51
• 縮略詞表51-52
• 致謝52-53
• 作者簡介53

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙穎慧;王偉;李越;周長良;臧鳳霞;孟慶文;陳洪巖;;1.1kb、2.7kb、3.0kb雞輸卵管組織特異性啟動子的克隆及細胞評價[J];中國家禽;2014年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張紅霞;徐鍵;;TLR2和TLR4在慢性炎癥輸卵管組織的表達及其意義探討[A];2012年浙江省婦產(chǎn)科學及圍產(chǎn)醫(yī)學學術年會暨《婦產(chǎn)科常見疾病規(guī)范化治療新進展》及《圍產(chǎn)醫(yī)學熱點追蹤》學習班論文集[C];2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 唐超;H9N2亞型禽流感病毒誘導蛋雞輸卵管組織凋亡及免疫相關基因表達的研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

2 黎瑞巧;蛋雞感染基因Ⅶd亞型NDV后輸卵管組織中病毒分布和Toll樣受體表達及炎性細胞浸潤研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年

3 寧楠楠;內源性硫化氫信號系統(tǒng)在人輸卵管組織中的表達及功能研究[D];山東大學;2014年

4 張紅霞;TLR2和TLR4在慢性炎癥輸卵管組織的表達及其意義探討[D];浙江大學;2011年

5 趙穎慧;雞輸卵管組織特異性啟動子克隆及功能驗證[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2014年

6 韓曉路;ER、PR在輸卵管妊娠患者輸卵管組織中的表達研究[D];昆明醫(yī)科大學;2013年

7 聶晶;婦科千金片對慢性盆腔炎大鼠卵巢、輸卵管組織Fas/Fas1及NF-κB/IκB信號通路的影響[D];湖南中醫(yī)藥大學;2014年

8 陳占莉;蛋雞感染H9N2亞型禽流感病毒后輸卵管中病毒分布及組織凋亡研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2014年

  本文關鍵詞：蛋雞感染基因Ⅶd亞型NDV后輸卵管組織中病毒分布和Toll樣受體表達及炎性細胞浸潤研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：306636