缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）是在缺氧細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種轉(zhuǎn)錄因子,在生物體氧平衡調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用.缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）是HIF-1活化的關(guān)鍵調(diào)控因子,參與細(xì)胞的生長、分化和凋亡的調(diào)節(jié).為進(jìn)一步了解家鵝的缺氧應(yīng)答系統(tǒng),本研究參考NCBI上公布的鵝HIF-1α基因序列設(shè)計(jì)引物,并成功克隆了馬崗鵝HIF-1α mRNA,獲得了HIF-1α完整的ORF序列,全長為2 403 bp,編碼800個氨基酸.研究表明,馬崗鵝HIF-1α基因結(jié)構(gòu)保守,在家禽中的同源性較高且與雞的同源性最高達(dá)到94.1%,蛋白結(jié)構(gòu)主體包含螺旋-環(huán)-螺旋模式（Helix loop helix, HLH）、PAS（Per ARNT Sim）蛋白、PAC（Motif C-terminal to PAS motifs）等結(jié)構(gòu)域,符合HIF-1α蛋白的結(jié)構(gòu)特征.組織表達(dá)差異分析結(jié)果顯示HIF-1α基因在肺和胰腺表達(dá)高,在肌肉中表達(dá)低,在氣管中幾乎不表達(dá). 

【文章來源】：仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院學(xué)報(bào). 2020,33(02)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

組織表達(dá)差異分析

用液氮研磨保存的鵝腦組織,提取RNA,并反轉(zhuǎn)錄成cDNA,利用設(shè)計(jì)的引物成功擴(kuò)增出一個片段,長度約為2 400 bp(圖1). 用cDNA作為模板,進(jìn)行多管擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行膠回收,取回收產(chǎn)物4.5 μL連接T載體,搖菌13 h后抽取質(zhì)粒做酶切鑒定,送往Sangon生物公司進(jìn)行核苷酸序列測序,測序結(jié)果表明擴(kuò)增的目的基因片段大小為2 403 bp(圖2),經(jīng)BlastN比對發(fā)現(xiàn),與Genbank上公布的預(yù)測序列相符,證明已成功克隆鵝HIF-1α基因.克隆的鵝HIF-1α基因包含完整的ORF,長度為2 403 bp,編碼800個氨基酸.圖2 HIF-1α質(zhì)粒的酶切鑒定

HIF-1α質(zhì)粒的酶切鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3063899