目的:研究ECEL1基因?qū)Ω伟┘?xì)胞凋亡的影響,為肝癌防治提供新的靶點(diǎn)。方法:應(yīng)用ECEL1基因的慢病毒載體,體外感染人肝癌細(xì)胞（BEL-7404、Huh-7）并通過熒光顯微鏡檢測感染效率。提取細(xì)胞總RNA以及總蛋白,通過qPCR以及Western blot檢測細(xì)胞中ECEL1 mRNA以及蛋白的表達(dá)水平;通過流式細(xì)胞術(shù)檢測BEL-7404、Huh-7細(xì)胞的凋亡率及細(xì)胞周期。最后應(yīng)用Caspase-Glo?3/7 Assay試劑盒檢測BEL-7404、Huh-7細(xì)胞中Caspase 3/7的活性。結(jié)果:1.ECEL1基因慢病毒載體體外感染人肝癌細(xì)胞后,檢測感染效率大于80%。2.shECEL1組BEL7404、Huh-7細(xì)胞內(nèi)的ECEL1 mRNA以及蛋白表達(dá)水平均要顯著低于shCtrl對照組（P<0.01）。3.流式檢測結(jié)果顯示,ECEL1基因敲減后BEL-7404、Huh-7細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率顯著上升,均要顯著高于shCtrl對照組（P<0.01）。4.shRNA抑制BEL-7404、Huh-7細(xì)胞內(nèi)ECEL1基因表達(dá)后,BEL-7404細(xì)胞S期明顯減少,G2/M期的細(xì)胞則... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞后shECEL1組和schCtrl組熒光鏡檢測圖（X100）

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文組的 1.001±0.065(P＜0.01)，敲減率達(dá)到 60.7%。此外，Western blot 結(jié)果顯示，BEL-7404 細(xì)胞中 shECEL1 組 ECEL1 蛋白表達(dá)水平僅為 0.2120±0.0203，顯著低于未敲減 shCtrl 組的 0.8868±0.0312（P＜0.01）；而 Huh-7 細(xì)胞中 shECEL1組蛋白質(zhì)的表達(dá)水平僅為 0.3230±0.0143，顯著低于未敲減 shCtrl 組的 0.8236±0.0443(P＜0.01)(圖 3)。綜上，ECEL1 mRNA 以及蛋白的表達(dá)水平均提示BEL-7404 細(xì)胞中的 ECEL1 基因敲減成功。

第 4 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果后 BEL7404、Huh-7 細(xì)胞的凋亡水平顯著上升，兩種細(xì)胞株(BEL7404、Huh-7)shECEL1 組與 schCtrl 組比較，差異均有顯著性(P<0.01)(表 5，圖 4)。表 5. ECEL1 基因敲減對 BEL-7404、Huh-7 細(xì)胞凋亡率(%)的影響注：與 shCtrl 相比較，**代表 P<0.01BEL-7404分組 BEL-7404 Huh-7shCtrlshECEL13.79±0.20547.50±0.3652**0.44±0.04027.78±0.0705**

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本文編號：3057554