本文關(guān)鍵詞：山西省非綜合征型耳聾基因的突變分析以及新突變功能預(yù)測(cè)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:耳聾是最常見的感覺系統(tǒng)缺陷性疾病之一,多為遺傳因素所致,其遺傳異質(zhì)性高,至今與其相關(guān)的耳聾基因有兩百多個(gè)。按遺傳性耳聾表型不同,可將其化分兩類,一類為綜合征型耳聾(syndromic hearing impairment,SHL),即除聽力下降外還伴有其他系統(tǒng)的臨床癥狀;另一類是非綜合征型耳聾(nonsyndromic hearing impairment,NSHL),即除聽力下降外無其他臨床癥狀,其中在遺傳性耳聾中,NSHL占70%以上�，F(xiàn)在許多研究表明耳聾主要與4個(gè)基因(GJB2、GJB3、SLC26A4、mt DNA)相關(guān),臨床上的耳聾基因診斷也是針對(duì)這4個(gè)基因的熱點(diǎn)突變進(jìn)行檢測(cè),然而有相當(dāng)一部分的NSHL患者并未找到這些熱點(diǎn)突變,因而得不到早期診斷,所以如何提高耳聾基因診斷率,成為難題也成為熱點(diǎn)。目的:本課題將基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)、高通量基因捕獲技術(shù)、Sanger測(cè)序三種方法相結(jié)合,統(tǒng)計(jì)山西地區(qū)NSHL常見基因熱點(diǎn)突變,尋找新的具有山西特色的熱點(diǎn)致病突變,從而為耳聾的早期診斷和治療提供依據(jù)。方法:由山西省太原市中心醫(yī)院收集山西省各地區(qū)聾啞學(xué)校NSHL患者300例,首先利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法篩查300例標(biāo)本4個(gè)常見致病基因20個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn),統(tǒng)計(jì)其各個(gè)位點(diǎn)的突變率;其次利用高通量基因捕獲技術(shù)檢測(cè)在20個(gè)位點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)突變的患者中選取的20例標(biāo)本,統(tǒng)計(jì)熱點(diǎn)突變位點(diǎn),針對(duì)新熱點(diǎn)突變,利用在線功能預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)其對(duì)蛋白功能的破壞性;最后利用Sanger測(cè)序檢測(cè)剩余標(biāo)本中經(jīng)高通量基因捕獲技術(shù)篩選出的熱點(diǎn)突變,統(tǒng)計(jì)其在散發(fā)人群中的突變率,從而驗(yàn)證篩選出的突變是否為山西NSHL患者的熱點(diǎn)突變(針對(duì)新發(fā)現(xiàn)的突變,以200例健康人標(biāo)本作為對(duì)照)。結(jié)果:1.基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法檢測(cè)300例標(biāo)本后,152例發(fā)生突變,其中GJB3基因未發(fā)現(xiàn)突變。2.在剩余的148例標(biāo)本中選取20例,經(jīng)過高通量基因捕獲技術(shù)檢測(cè)后,發(fā)現(xiàn)三個(gè)熱點(diǎn)突變:SLC26A4基因c.1334TG(p.L445W)突變、WFS1基因c.2596GA(p.D866N)突變、MYO7A基因c.5662CT(p.H1888Y)突變,其中c.1334TG(p.L445W)、c.2596 GA(p.D866N)是已被報(bào)道過的致病突變;另一個(gè)是首次發(fā)現(xiàn)的可疑致病性突變。3.通過對(duì)剩余的128例標(biāo)本針對(duì)上述三個(gè)熱點(diǎn)突變進(jìn)行Sanger測(cè)序驗(yàn)證后,有3例發(fā)生c.2596 GA(p.D866N),未發(fā)現(xiàn)c.1334TG(p.L445W)和c.5662CT(p.H1888Y)突變,正常對(duì)照組也未發(fā)現(xiàn)c.5662CT(p.H1888Y)突變,此突變致病性有待進(jìn)一步研究。結(jié)論:1.山西省遺傳性耳聾的主要致病基因?yàn)镚JB2、SLC26A4、mt DNA,但各個(gè)突變位點(diǎn)攜帶率與其他地區(qū)差別明顯;c.235delC和c.299-300delAT突變是GJB2基因的熱點(diǎn)突變位點(diǎn),IVS7-2AG和c.2168AG突變是SLC26A4基因的熱點(diǎn)突變位點(diǎn),c.1555AG突變是線粒體12S r RNA基因的熱點(diǎn)突變位點(diǎn)。2.WFS1基因c.2596GA(p.D866N)突變與山西省NSHL的發(fā)生密切相關(guān);SLC26A4基因c.1334TG(p.L445 W)突變?cè)诓煌N族中突變攜帶率有明顯差異。3.MYO7A基因c.5662CT(p.H1888Y)突變是首次發(fā)現(xiàn)的可疑致病性突變。
【關(guān)鍵詞】：基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜 高通量基因捕獲 Sanger測(cè)序 耳聾 功能預(yù)測(cè)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R764.43;R440
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 英文縮略詞表11-12
• 前言12-13
• 第一部分 基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)耳聾常見基因20個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)13-24
• 1 研究對(duì)象13
• 2 研究方法13-16
• 2.1 試劑與儀器13-14
• 2.2 質(zhì)譜法實(shí)驗(yàn)步驟14-15
• 2.3 一代測(cè)序驗(yàn)證15-16
• 3 研究結(jié)果16-22
• 3.1 質(zhì)譜結(jié)果16-19
• 3.2 一代測(cè)序結(jié)果19-21
• 3.3 Sanger測(cè)序結(jié)果與質(zhì)譜結(jié)果比較21-22
• 4 討論22-24
• 第二部分 高通量基因捕獲技術(shù)尋找熱點(diǎn)突變以及新熱點(diǎn)突變功能預(yù)測(cè)24-37
• 1 研究對(duì)象24
• 2 研究方法24-30
• 2.1 高通量捕獲技術(shù)實(shí)驗(yàn)步驟24-26
• 2.2 一代測(cè)序驗(yàn)證26-29
• 2.3 新熱點(diǎn)突變功能預(yù)測(cè)29-30
• 3 研究結(jié)果30-35
• 3.1 高通量基因捕獲結(jié)果30-31
• 3.2 一代測(cè)序驗(yàn)證結(jié)果31-32
• 3.3 一代測(cè)序與高通量基因捕獲結(jié)果比較32-34
• 3.4 新熱點(diǎn)突變功能預(yù)測(cè)結(jié)果34-35
• 4 討論35-37
• 第三部分 檢測(cè)散發(fā)人群中高通量捕獲技術(shù)篩查出的熱點(diǎn)突變37-43
• 1 研究對(duì)象37
• 2 研究方法37-40
• 2.1 試劑和儀器37
• 2.2 實(shí)驗(yàn)步驟37-40
• 3 研究結(jié)果40-41
• 3.1 電泳結(jié)果40
• 3.2 測(cè)序結(jié)果40-41
• 4 討論41-43
• 小結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 綜述47-60
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 致謝60-61
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果61-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷62

【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：山西省非綜合征型耳聾基因的突變分析以及新突變功能預(yù)測(cè)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：305678