背景食管癌是常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率在全球分別位居第7位和第6位。食管癌的分布具有地域性特點,在我國食管癌主要分布在太行山地區(qū),食管鱗狀細胞癌（ESCC）是主要的病理類型。環(huán)境因素通過改變遺傳學和表觀遺傳學修飾在食管癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。連接黏附分子-3（JAM3）是JAM家族中的一員,又稱連接黏附分子-C（JAMC）。最近發(fā)現(xiàn)JAM3在結直腸癌中頻繁發(fā)生甲基化,且JAM3在結直腸癌中為抑癌基因,但是JAM3基因在食管癌中的甲基化情況尚不清楚。目的探討JAM3基因啟動子區(qū)在食管癌中的甲基化情況及其表達調控以及JAM3基因啟動子區(qū)異常甲基化作為食管鱗癌的潛在診斷標志物的可能性。方法1.用半定量RT-PCR檢測5-氮雜-2’-脫氧胞苷（5-Aza-dc）處理前后食管癌細胞系KYSE140、KYSE150、KYSE410、KYSE450、COLO680N、KYSE520和TE13中JAM3基因的表達情況。2.應用甲基化特異性PCR（MSP）檢測食管癌細胞系中JAM3基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)。3.用MSP技術檢測正常食管粘膜組織中JAM3基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài),排除JA... 

【文章來源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院河南省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

-Aza-dc處理前后食管癌細胞系中JAM3的表達情況；

25胞中JAM3表達水平不變，KYSE150、KYSE410、COLO680N、TE13細胞JAM3表達恢復(見圖2.1）。上述結果表明JAM3基因在食管癌細胞系中的表達受到甲基化的調控。圖2.15-Aza-dc處理前后食管癌細胞系中JAM3的表達情況；（-）未處理的細胞系；(＋)：處理的細胞系；ddH2O：雙蒸餾水，作為空白對照，排除體系污染；GAPDH：作為參照檢測cDNA質量；KYSE520、KYSE140、KYSE450、KYSE410、COLO680N、TE13、KYSE150為人的食管癌細胞系名稱2.2食管癌細胞中JAM3基因啟動子區(qū)甲基化情況2.2.1對照組DNA對甲基化特異性PCR的引物及體系進行驗證我們應用JAM3基因特異性的甲基化的引物進行PCR擴增之后，MSP檢測硫化后IVD和NL，結果顯示：硫化后IVD為甲基化所對應的清晰明亮條帶，硫化后NL無甲基化對應條帶；JAM3基因特異性的非甲基化的引物進行PCR擴增之后，MSP檢測硫化后IVD和NL，結果顯示：僅以硫化后的NL為非甲基化清晰明亮條帶，硫化后IVD無非甲基化所對應的條帶出現(xiàn)。陰性對照即雙蒸餾水中無任何條帶出現(xiàn)（見圖2.2）。上述結果表明：JAM3的MSP引物具有特異性，反應體系無污染。圖2.2MSP檢測對照組DNAJAM3基因啟動子區(qū)甲基化情況IVD：體外甲基化DNA；ddH2O：雙蒸餾水；NL：正常人外周血淋巴細胞DNA；M：甲基化；U：非甲基化；

262.2.2食管癌細胞系中JAM3基因啟動子區(qū)甲基化情況本實驗所應用MSP技術檢測JAM3基因啟動區(qū)在食管癌細胞系中甲基化情況。MSP檢測結果示：JAM3基因啟動子區(qū)在細胞KYSE520、KYSE140、KYSE450表現(xiàn)為非甲基化；在細胞KYSE150、KYSE410、TE13、COLO680N中呈完全甲基化狀態(tài)(見圖2.3)。圖2.3MSP檢測食管癌細胞系JAM3基因啟動子區(qū)甲基化情況IVD：體外甲基化DNA；ddH2O：雙蒸餾水；NL：正常人外周血淋巴細胞DNA；M：甲基化；U：非甲基化；KYSE520、KYSE140、KYSE450、KYSE410、COLO680N、TE13、KYSE150為人的食管癌細胞系名稱2.2.3正常食管黏膜中JAM3基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)本研究應用MSP技術對5例正常食管黏膜組織中JAM3基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)進行檢測，結果顯示正常食管黏膜組織中JAM3均為非甲基化，排除了JAM3基因甲基化的組織特異性(見圖3.1)。圖3.1MSP檢測正常食管粘膜組織中JAM3基因啟動子區(qū)域的甲基情況IVD：體外甲基化DNA；ddH2O：雙蒸餾水；NL：正常人外周血淋巴細胞DNA；EN1-EN5：正常食管黏膜組織；M：甲基化；U：非甲基化


本文編號：3051738