目前世界上廣泛栽培的歐洲葡萄抗真菌能力差,尤其容易感染白粉病。利用基因工程技術提高葡萄的抗病性是葡萄分子育種的重要方向之一。課題組在前期研究中將擬南芥廣譜抗性基因RPW8.2轉到歐洲感病葡萄‘無核白’中,在室內接種白粉菌,轉基因葡萄提高了對白粉菌的抗性。本研究是在前期研究的基礎上,將該轉基因葡萄栽植于塑料大棚中,觀察轉基因葡萄的生長特性,檢測其對白粉病的抗性。主要結果如下:1.RPW8.2基因在轉基因無核白葡萄中的表達并未影響植株的生物學特性;轉基因與野生型植株的物候期時間差控制在5天以內;兩周內的枝條伸長量差值控制在4 cm左右。2.對扦插苗和離體葉片接種葡萄白粉菌NAFU1,在溫室中接種7 d后,在光照培養(yǎng)箱接種3、5、7、14 d后,臺盼藍染色,觀察菌絲生長。結果表明,野生型植株葉片上的白粉菌菌絲長度、孢子梗數均為轉基因植株的2倍以上,吸器健康、飽滿,但在轉基因植株葉片上吸器發(fā)育不良、顏色變深。白粉菌菌絲在轉基因植株上的生長受到了抑制,轉基因葡萄對白粉菌NAFU1的抗性高于野生型植株。3.轉基因葡萄自然感染白粉菌15 d后,對葉片進行臺盼藍和DAB染色并統計孢子量。結果表明,轉基... 

【文章來源】：西北農林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同生長環(huán)境中的轉基因葡萄A：玻璃溫室內的轉基因扦插苗；B：光照培養(yǎng)箱中的轉基因植株離體葉片；

10無核白轉基因葡萄生物學特性觀察和白粉病抗性評價第三章 結果與分析3.1 轉基因葡萄株系 PCR 檢測為了確保移栽后存活的植株為轉基因植株，提取其基因組 DNA，用 BamR82F 和SeqYFPR 特異引物進行 PCR 檢測，相對應的陽性對照為自身啟動子農桿菌菌液，陰性對照為野生型無核白植株。如圖 2 所示，在菌液質粒和 24 株轉基因植株中可以擴增出大小為 750 bp 的 RPW8.2 基因片段，而陰性對照植株則無法擴增出該片段。結果表明，供試植株的陽性率為 100%，為后續(xù)研究奠定了材料基礎。

圖 3 轉基因葡萄株系的 Western Blot 檢測Ponceau S，麗春紅染色 Rubisco 蛋白；WT，野生型株系；1-24，24 個轉基因株系。Fig. 3 Western Blot analysis of transgenic grapevines S, showing the protein stained by ponceau S; WT, wild type line; 1-24, transgenic lines oitive plants.萄物候期觀察17 年 3 月，將生長狀況一致的轉基因和野生型無核白葡萄從科研溫室移栽采用籬架式管理。由于樹勢較弱，當年未進行修剪。觀察記錄植株的生長源基因拷貝數的轉基因植株在生長勢上并無差別（圖 4）。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]無核白葡萄體細胞胚再生體系建立與轉基因研究[D]. 周起.西北農林科技大學 2014

碩士論文
[1]陜西關中地區(qū)兩種栽培模式下不同鮮食葡萄品種品質特性[D]. 孔繁超.西北農林科技大學 2017
[2]擬南芥廣譜抗病基因RPW8.2轉化無核白葡萄的研究[D]. 李亞娟.西北農林科技大學 2016
[3]中國野生毛葡萄芪合成酶基因VqSTS6轉化無核白葡萄的研究[D]. 程斯妍.西北農林科技大學 2015
[4]葡萄果形相關基因的克隆及功能分析[D]. 宋新新.南京農業(yè)大學 2014



本文編號：3039258