醇脫氫酶（ADHs,EC 1.1.1.1）,是屬于氧化還原酶的第一亞類,該酶通�？梢允褂肗AD（P）H作為輔酶將醛或酮轉(zhuǎn)化為相對應(yīng)的醇。醇脫氫酶由于其各種獨特的生理生化性質(zhì)和酶學(xué)性質(zhì),因而被廣泛的應(yīng)用于各個方面,主要是醫(yī)學(xué)研究、化工生產(chǎn)、食品研究以及生物工程研究。在本論文中,在大腸桿菌中成功地表達了5個來源于奇異變形桿菌Proteus mirabilis JN458中的醇脫氫酶,優(yōu)化了表達質(zhì)粒和誘導(dǎo)條件,并探究了五種醇脫氫酶的酶學(xué)性質(zhì),為研究奶酪芳香氣味的產(chǎn)生奠定了分子生物學(xué)基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:（1）成功克隆了5個來源于P.mirabilis JN458的醇脫氫酶基因（adh1、adh2、adh3、adh4、adh5）,將5個基因成功與pColdⅡ質(zhì)粒相連,構(gòu)建重組質(zhì)粒后,將其轉(zhuǎn)入Escherichia coli BL21（DE3）中并對其進行表達。預(yù)測得到的5個醇脫氫酶的蛋白分子量分別為40.1kDa、41.3 kDa、42.4 kDa、39.3 kDa和37.3 kDa。酶活驗證發(fā)現(xiàn)5個醇脫氫酶對苯乙醛均具有一定的酶活。（2）由于pColdⅡ質(zhì)粒的蛋白表達量和酶活不高,因此對表... 

【文章來源】：江南大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 醇脫氫酶
        1.1.1 醇脫氫酶的簡介
        1.1.2 醇脫氫酶的來源
        1.1.3 醇脫氫酶的分類
        1.1.4 醇脫氫酶的結(jié)構(gòu)
        1.1.5 醇脫氫酶的催化歷程
        1.1.6 醇脫氫酶的性質(zhì)
        1.1.7 醇脫氫酶的應(yīng)用
        1.1.8 醇脫氫酶的研究進展
    1.2 論文的立題依據(jù)和意義
    1.3 論文的研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌種與質(zhì)粒
        2.1.2 主要實驗儀器
        2.1.3 酶與實驗藥品
        2.1.4 培養(yǎng)基
    2.2 實驗方法
        2.2.1 P.mirabilis JN458基因組的提取
        2.2.2 E.coli感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化
        2.2.3 瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.4 ADHs基因的克隆和重組菌株的構(gòu)建
        2.2.5 重組大腸桿菌的誘導(dǎo)表達
        2.2.6 表達質(zhì)粒的選擇
        2.2.7 重組大腸桿菌的生長曲線
        2.2.8 重組大腸桿菌誘導(dǎo)條件的優(yōu)化
        2.2.9 蛋白電泳
        2.2.10 蛋白濃度測定
        2.2.11 ADHs的分離純化
        2.2.12 ADHs的酶活測定
        2.2.13 苯乙醇的高效液相色譜檢測
        2.2.14 ADHs酶學(xué)性質(zhì)研究
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 ADHs的預(yù)測及克隆表達驗證
        3.1.1 ADHs的預(yù)測
        3.1.2 ADHs的基因克隆
        3.1.3 ADHs的表達驗證
        3.1.4 ADHs的序列分析
    3.2 質(zhì)粒的選擇
        3.2.1 質(zhì)粒的選擇
        3.2.2 不同重組質(zhì)粒酶活驗證
    3.3 誘導(dǎo)條件的優(yōu)化
        3.3.1 培養(yǎng)基的初始pH的優(yōu)化
        3.3.2 誘導(dǎo)初始細(xì)胞濃度的優(yōu)化
        3.3.3 誘導(dǎo)劑濃度的優(yōu)化
        3.3.4 誘導(dǎo)溫度的優(yōu)化
        3.3.5 誘導(dǎo)后的培養(yǎng)時間的優(yōu)化
        3.3.6 搖瓶溶氧的優(yōu)化
    3.4 ADHs的分離純化
    3.5 ADHs的酶學(xué)性質(zhì)
        3.5.1 ADHs的最適反應(yīng)pH和 pH穩(wěn)定性
        3.5.2 ADHs的最適反應(yīng)溫度和溫度穩(wěn)定性
        3.5.3 ADHs的底物特異性
        3.5.4 金屬離子、EDTA對酶活性的影響
        3.5.5 ADHs的動力學(xué)參數(shù)
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻
附錄1：作者在攻讀碩士學(xué)位期間的科研成果
附錄2：苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線測定圖


【參考文獻】：
期刊論文
[1]醇脫氫酶的純化、酶學(xué)性質(zhì)及其不對稱催化[J]. 程書蘭,魏淼,許琳,嚴(yán)明.  生物加工過程. 2016(01)
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碩士論文
[1]釀酒酵母乙醇脫氫酶2和乙醛脫氫酶以及兩種水生動物抗菌肽的表達和酶活分析[D]. 舒梅.南昌大學(xué) 2011
[2]人乙醇脫氫酶ADH1B2的基因表達和活性分析[D]. 湯甜甜.浙江大學(xué) 2011
[3]乙醇脫氫酶的克隆表達及生物活性分析[D]. 鮑文娜.浙江大學(xué) 2007



本文編號：3032685