目的評價桿狀病毒介導(dǎo)的內(nèi)皮抑素和血管抑素融合蛋白（hEA）的抗肝癌效果。方法以質(zhì)粒pFastBac DUAL為骨架,將pPh啟動子替換為CMV,然后在其下游插入hEA基因,獲得重組質(zhì)粒pBac-ChEA,將pBac-ChEA轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)藍(lán)白斑篩選獲得重組Bacmid,然后經(jīng)脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染Sf-9昆蟲細(xì)胞,獲得重組桿狀病毒Bac-ChEA。將重組病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)HUVEC細(xì)胞,通過ELISA、MTT、細(xì)胞劃痕和血管網(wǎng)絡(luò)形成檢測hEA蛋白的表達(dá)以及對HUVEC細(xì)胞的增殖、遷移和血管形成的影響;建立裸鼠皮下肝癌腫瘤模型,評價桿狀病毒介導(dǎo)的hEA的抗肝癌效果。結(jié)果經(jīng)PCR鑒定成功構(gòu)建了重組桿狀病毒Bac-ChEA;hEA蛋白在Bac-ChEA轉(zhuǎn)導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞中成功獲得了表達(dá)并且能夠有效抑制HUVEC細(xì)胞的增殖、遷移以及血管網(wǎng)絡(luò)的形成;體內(nèi)結(jié)果表明Bac-ChEA組能有效抑制肝癌腫瘤體積的增長,小鼠壽命（中位生存期）從Bac-CMV組的24 d顯著延長至Bac-ChEA組的36 d（P <0.05）。結(jié)論本研究成功讓hEA蛋白在桿狀病毒中獲得了表達(dá),并且能夠有效地抑制HUVE... 

【文章來源】：實用醫(yī)學(xué)雜志. 2020,36(15)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

重組桿狀病毒Bac-ChEA PCR鑒定

通過劃痕實驗評估其對細(xì)胞遷移能力的影響。結(jié)果見圖4,Bac-ChEA組與Bac-CMV和空白對照組相比，細(xì)胞遷移速度減慢，進(jìn)一步通過計算劃痕傷口面積，發(fā)現(xiàn)Bac-ChEA組與Bac-CMV組相比能顯著抑制HU-VEC細(xì)胞傷口愈合（P<0.05），而Bac-CMV組與空白組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。說明桿狀病毒介導(dǎo)的hEA蛋白能夠有效地抑制HUVEC細(xì)胞的遷移。圖3 桿狀病毒介導(dǎo)的hEA蛋白對HUVEC細(xì)胞增殖能力的影響（n=3)

桿狀病毒介導(dǎo)的hEA蛋白對HUVEC細(xì)胞增殖能力的影響（n=3)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肝細(xì)胞癌對化療耐藥的機制研究進(jìn)展[J]. 黃康,彭貴主,葉啟發(fā).  實用醫(yī)學(xué)雜志. 2018(22)



本文編號：3032000