小麥是我國重要的糧食作物,在世界各地均有廣泛的種植,但蚜蟲經(jīng)常給小麥的產(chǎn)量和品質(zhì)帶來嚴重威脅。利用化學(xué)藥物防治是控制蚜蟲危害的常用方法,然而農(nóng)藥的過度使用會導(dǎo)致嚴重的環(huán)境污染并影響人類的健康。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗蚜小麥新品種則有望減少化學(xué)藥物的使用并提高小麥的產(chǎn)量。本課題以掌葉半夏凝集素基因（PPA）轉(zhuǎn)化石4185小麥獲得的轉(zhuǎn)基因后代材料為為研究對象,在探究其PPA基因的存在位置及遺傳方式分析的基礎(chǔ)上,通過進行回交轉(zhuǎn)育及同質(zhì)化篩選,獲得具有胞質(zhì)遺傳且同質(zhì)化程度高的抗蚜轉(zhuǎn)基因小麥。本課題的研究工作主要結(jié)果如下:通過正反交實驗確定了目的基因PPA在轉(zhuǎn)基因小麥中的遺傳方式為既存在細胞核遺傳,也存在胞質(zhì)遺傳的形式;通過回交、測交實驗,以及PCR鑒定,共篩選出27個較為優(yōu)秀的純合轉(zhuǎn)基因后代材料,即細胞核中沒有PPA基因存在、并且具有胞質(zhì)遺傳的純合后代。通過對目的基因的PCR鑒定,結(jié)果表明:通過多代回交之后,PPA基因依然存在于轉(zhuǎn)基因小麥中;通過對回交后代的同質(zhì)化鑒定分析表明,轉(zhuǎn)基因小麥后代的抗蚜性,由于后代的同質(zhì)化程度不同所以表現(xiàn)出的抗蚜效果也不盡相同;不同的材料之間、同一個材料的不同株行,以及... 

【文章來源】：河北科技大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒圖譜pCambia1380+ubi+PPA+GFP（2）轉(zhuǎn)基因小麥材料在室內(nèi)實驗和田間實驗中都表現(xiàn)出了良好的抗蚜效果

142.4結(jié)果與分析2.4.1正反交F1代的PCR鑒定及結(jié)果分析正交是以轉(zhuǎn)基因材料作為母本，野生型材料為父本進行雜交。以正交F1代基因組DNA作為模板，特異性擴增PPA基因的PCR結(jié)果如圖2-1所示。結(jié)果顯示，正交后代全部擴出了特異且清晰的目的條帶。證明轉(zhuǎn)基因小麥中確實存目的基因PPA。但無法判斷其具體遺傳方式是細胞核遺傳還是細胞質(zhì)遺傳。M：Marker；+：PPA質(zhì)粒；—：野生型；1-16：正交F1代16個樣本圖2-1正交F1代材料的PCR結(jié)果反交是以野生型材料作為母本，轉(zhuǎn)基因材料為父本進行雜交。以反交F1代基因組DNA作為模板，特異性擴增PPA基因的PCR結(jié)果如圖2-2所示。結(jié)果顯示，反交各個后代也均擴增出了特異且清晰的目的條帶。這說明轉(zhuǎn)基因小麥存在細胞核遺傳的遺傳方式。M：Marker；+：PPA質(zhì)粒；—：野生型；1-19：反交F1代19個樣本圖2-2反交F1代材料的PCR結(jié)果至此，正反交的F1后代均能擴增出目的基因，表明目的基因在轉(zhuǎn)基因小麥中存在細胞核的遺傳方式，但仍然無法證明有無細胞質(zhì)遺傳的存在。2.4.2正反交F2代PCR鑒定及結(jié)果分析

142.4結(jié)果與分析2.4.1正反交F1代的PCR鑒定及結(jié)果分析正交是以轉(zhuǎn)基因材料作為母本，野生型材料為父本進行雜交。以正交F1代基因組DNA作為模板，特異性擴增PPA基因的PCR結(jié)果如圖2-1所示。結(jié)果顯示，正交后代全部擴出了特異且清晰的目的條帶。證明轉(zhuǎn)基因小麥中確實存目的基因PPA。但無法判斷其具體遺傳方式是細胞核遺傳還是細胞質(zhì)遺傳。M：Marker；+：PPA質(zhì)粒；—：野生型；1-16：正交F1代16個樣本圖2-1正交F1代材料的PCR結(jié)果反交是以野生型材料作為母本，轉(zhuǎn)基因材料為父本進行雜交。以反交F1代基因組DNA作為模板，特異性擴增PPA基因的PCR結(jié)果如圖2-2所示。結(jié)果顯示，反交各個后代也均擴增出了特異且清晰的目的條帶。這說明轉(zhuǎn)基因小麥存在細胞核遺傳的遺傳方式。M：Marker；+：PPA質(zhì)粒；—：野生型；1-19：反交F1代19個樣本圖2-2反交F1代材料的PCR結(jié)果至此，正反交的F1后代均能擴增出目的基因，表明目的基因在轉(zhuǎn)基因小麥中存在細胞核的遺傳方式，但仍然無法證明有無細胞質(zhì)遺傳的存在。2.4.2正反交F2代PCR鑒定及結(jié)果分析

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]小麥主要害蟲發(fā)生規(guī)律與無人機施藥防治效果研究[D]. 商艷蘭.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]基因槍和農(nóng)桿菌介導(dǎo)MiR396基因?qū)π←溒贩N的遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 宋琳琳.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[5]PPA基因改造、載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化[D]. 姚彬.河北科技大學(xué) 2012



本文編號：3014384