目的:構(gòu)建檢測(cè)EGFR基因突變所用的質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品。方法:從健康人淋巴細(xì)胞基因組克隆,設(shè)計(jì)四對(duì)引物引入突變位點(diǎn),RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA,采用普通PCR的方法,擴(kuò)增野生型EGFR基因外顯子19片段和含缺失突變（del E746-A750）的EGFR基因外顯子19片段,野生型EGFR基因外顯子21和含點(diǎn)突變（L858R）的EGFR基因外顯子21片段,并分別克隆至載體pEGFP-C1中,構(gòu)建含EGFR基因外顯子19和外顯子21的重組質(zhì)粒,用于檢測(cè)EGFR基因突變的質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品。結(jié)果:構(gòu)建出含EGFR基因外顯子19和外顯子21的重組質(zhì)粒,野生型重組質(zhì)粒命名為pEGFP-C1-EGFR-19和pEGFP-C1-EGFR-21,突變型重組質(zhì)粒命名為pEGFP-C1-EGFR-19（del E746-A750）和pEGFP-C1-EGFR-21（L858R）,通過酶切和測(cè)序鑒定證明構(gòu)建成功,濃度、純度、穩(wěn)定性達(dá)到質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品的要求。結(jié)論:成功構(gòu)建了陽(yáng)性和陰性對(duì)照質(zhì)粒,為后續(xù)構(gòu)建檢測(cè)EGFR基因突變的方法使用。 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：34 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞對(duì)照
第1章 引言
第2章 重組質(zhì)粒的構(gòu)建和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)
    2.1 概述
    2.2 材料和方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 野生型和突變型EGFR基因片段的獲取
        2.3.2 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
        2.3.3 重組質(zhì)粒測(cè)序鑒定
        2.3.4 質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)濃度的測(cè)定
        2.3.5 質(zhì)粒穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)
    2.4 討論
第3章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3013270