目的:構建檢測EGFR基因突變所用的質控品和標準品。方法:從健康人淋巴細胞基因組克隆,設計四對引物引入突變位點,RNA反轉錄cDNA,采用普通PCR的方法,擴增野生型EGFR基因外顯子19片段和含缺失突變（del E746-A750）的EGFR基因外顯子19片段,野生型EGFR基因外顯子21和含點突變（L858R）的EGFR基因外顯子21片段,并分別克隆至載體pEGFP-C1中,構建含EGFR基因外顯子19和外顯子21的重組質粒,用于檢測EGFR基因突變的質控品和標準品。結果:構建出含EGFR基因外顯子19和外顯子21的重組質粒,野生型重組質粒命名為pEGFP-C1-EGFR-19和pEGFP-C1-EGFR-21,突變型重組質粒命名為pEGFP-C1-EGFR-19（del E746-A750）和pEGFP-C1-EGFR-21（L858R）,通過酶切和測序鑒定證明構建成功,濃度、純度、穩(wěn)定性達到質控品和標準品的要求。結論:成功構建了陽性和陰性對照質粒,為后續(xù)構建檢測EGFR基因突變的方法使用。 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：34 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞對照
第1章 引言
第2章 重組質粒的構建和穩(wěn)定性評價
    2.1 概述
    2.2 材料和方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 結果
        2.3.1 野生型和突變型EGFR基因片段的獲取
        2.3.2 重組質粒的酶切鑒定
        2.3.3 重組質粒測序鑒定
        2.3.4 質粒標準濃度的測定
        2.3.5 質粒穩(wěn)定性的評價
    2.4 討論
第3章 結論
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]厄洛替尼與吉非替尼治療非小細胞肺癌腦轉移患者的療效比較研究[J]. 金燁,戴莉莉,陳曉紅,秦斌斌,馮潔,沈斌.  癌癥進展. 2016(05)
[2]DC/CIK聯(lián)合吉非替尼治療EGFR突變的晚期非小細胞肺癌的療效[J]. 蔡向敬,王媛,王偉.  中國老年學雜志. 2016(06)
[3]EGFR-TKI與化療比較一線治療晚期非小細胞肺癌有效性和安全性的系統(tǒng)評價[J]. 李向蓮,唐雪莉,李幼平,李萃萃,張小紅.  中國循證醫(yī)學雜志. 2016(02)
[4]晚期和局部晚期NSCLC患者βⅢ-tubulin和p53表達與紫杉醇敏感性的關系[J]. 郭惠琴,趙宇.  癌癥進展. 2011(04)
[5]變性高效液相色譜法檢測多種途徑獲取的非小細胞肺癌組織表皮生長因子受體基因突變[J]. 陳思遠,陳志紅,郭愛林,蘇健,黃迎,陳世良,張緒超,楊學寧,楊衿記,吳一龍.  中國肺癌雜志. 2010(09)
[6]中國肺癌發(fā)病死亡的估計和流行趨勢研究[J]. 陳萬青,張思維,鄒小農.  中國肺癌雜志. 2010(05)
[7]表皮生長因子受體酪氨酸激酶突變對于非小細胞肺癌療效影響的研究進展[J]. 董喜鳳,宋強.  中國肺癌雜志. 2009(12)
[8]肺癌EGFR基因突變檢測方法的研究進展[J]. 奉水東,譚紅專.  中國肺癌雜志. 2008(03)
[9]EGFR在女性非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[J]. 孫光遠,趙學維,李兵,徐志飛,何金,劉惠敏.  中國癌癥雜志. 2007(05)



本文編號：3013270