目的確定問號鉤端螺旋體vWF-A基因產(chǎn)物結(jié)合人膠原蛋白的作用與機(jī)制。方法采用生物信息學(xué)軟件分析問號鉤端螺旋體黃疸出血群賴型賴株vWF-A基因（LA₀012、LA₀697和LA₄207）產(chǎn)物結(jié)構(gòu)與功能。構(gòu)建上述基因vWF-A功能結(jié)構(gòu)域片段原核表達(dá)系統(tǒng),采用SDS-PAGE和Ni-NTA親和層析法檢查目的重組蛋白rLep0012、rLep0697和rLep4207表達(dá)情況和提純效果。采用ELISA和表面等離子共振法（SPR）檢測目的重組蛋白與人Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型膠原蛋白（hCOL1/3/4/6）的結(jié)合能力。采用實(shí)時熒光定量RT-PCR和Western blot檢測問號鉤端螺旋體賴株感染人和小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC和EOMA）時vWF-A基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平變化。結(jié)果 vWF-A基因產(chǎn)物均為含vWF-A超家族結(jié)構(gòu)域表面或跨膜蛋白,但LA₀697和LA₄207基因還含有金屬離子依賴性黏附位點(diǎn)（MIDAS）。所構(gòu)建的原核表達(dá)系統(tǒng)能有效表達(dá)目的重組蛋白,Ni-NTA親和層析法提純后SDS-... 

【文章來源】：中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2020,40(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁


本文編號：3008178