發(fā)布時間：2021-01-27 07:46

　　香菇是人們最喜愛的食用菌之一,栽培面積廣,營養(yǎng)價值高,香味濃郁,口感鮮美。氧氣是食用菌生產(chǎn)過程中重要的環(huán)境因素之一,對香菇的生長發(fā)育至關(guān)重要,尤其是在菌種培養(yǎng)制作環(huán)節(jié)。本研究采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法,將透明顫菌血紅蛋白基因轉(zhuǎn)入香菇,提高香菇攝取氧氣的能力,并考察對香菇其他生理特性的影響。（1）根據(jù)GeneBank中透明顫菌血紅蛋白基因（Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb）的CDS序列,人工合成vgb基因,以質(zhì)粒pBHg-BCA1-gpd為載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒pBHg-vgb-gpd。用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化食用真菌的方法,先將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105,然后將帶有質(zhì)粒pBHg-vgb-gpd的農(nóng)桿菌EHA105與香菇L26菌絲共培養(yǎng)。再將共培養(yǎng)過的菌絲轉(zhuǎn)移到含有潮霉素和頭孢噻肟霉素的篩選培養(yǎng)基上篩選,對長出的擬轉(zhuǎn)化子提取基因組,然后進(jìn)行PCR檢測。PCR檢測結(jié)果顯示目的基因已成功整合到受體菌株香菇L26。（2）通過遺傳穩(wěn)定性與PCR驗證,最終得到四個轉(zhuǎn)化子菌株（其中兩個為原生質(zhì)體純化后的轉(zhuǎn)化子）。RT-PCR分析和qPCR分析,確定vgb基因在香菇中成功轉(zhuǎn)錄,并計算... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

香菇有性生活史Fig.1-1.ThesexuallifeofLenutinulaedodes

圖 2-1 pBHg-BCA1-gpd 載體Fig.2-1 pBHg-BCA1-gpd vectorpBHg-BCA1-gpd 質(zhì)粒用 SpeⅠ和 ApaⅠ進(jìn)行雙酶切，然后回收純化因的載體。

圖 2-2：pBHg-BCA1-gpd 質(zhì)粒雙酶切Fig.2-2 The double digestion of vector pBHg-BCA1-gpdse); 泳道 1：pBHg-BCA1-gpd 質(zhì)粒;泳道 2：pBHg-BCBCA1 基因(177bp）被切除，因小片段長度太

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PEG介導(dǎo)的蘋果果生刺盤孢Colletotrichum fructicola原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化[J]. 韓小路,白靜科,張瑋,張榮,孫廣宇.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2016(03)
[2]香菇工廠化栽培的難點[J]. 黃毅.  食藥用菌. 2016(01)
[3]靈芝品種優(yōu)化——VHb基因轉(zhuǎn)化靈芝[J]. 崔紫競,杜鵑,汪子淳,邱旭汶,林忠平.  生物技術(shù)世界. 2015(08)
[4]脂質(zhì)體介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化雙孢蘑菇菌褶及1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸氧化酶基因（ACO）功能初探[J]. 張巖,張朝輝,劉冬忍,王小飛,王景冒,邱立友.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2015(08)
[5]脂質(zhì)體技術(shù)的轉(zhuǎn)化應(yīng)用分析及關(guān)鍵問題研究[J]. 柯剛,伍振峰,楊明,任桂林,黃居敏,胡鵬翼,王賽君.  世界中醫(yī)藥. 2015(03)
[6]不同基質(zhì)中香菇菌絲生長期胞外酶活性變化的研究[J]. 王偉科,陸娜,周祖法,袁衛(wèi)東,宋吉玲,閆靜.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(14)
[7]酵母電擊轉(zhuǎn)化效率影響因素研究[J]. 王紅日,陳雪燕,程敦公,李青,曹新有.  山東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(01)
[8]香菇液體培養(yǎng)過程中3種胞外酶酶活的變化[J]. 楊舒貽,楊暉,閭瓊妮,徐雅萍,趙鸝.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(14)
[9]食用菌遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J]. 程凱,祝子坪,王金斌,陳建中,鮑大鵬,陳明杰,張勁松,譚琦,吳瀟,唐雪明.  食用菌學(xué)報. 2012(01)
[10]基因槍法遺傳轉(zhuǎn)化雙孢蘑菇菌褶[J]. 曹育博,劉天翔,周巍巍,高玉千,戚元成,申進(jìn)文,邱立友.  食用菌學(xué)報. 2011(03)

碩士論文
[1]異源表達(dá)透明顫菌血紅蛋白基因提高靈芝細(xì)胞中靈芝酸和靈芝多糖的生產(chǎn)[D]. 李煥軍.昆明理工大學(xué) 2016
[2]結(jié)球白菜中抗寒基因的克隆及香菇表達(dá)載體的構(gòu)建[D]. 朱莉莎.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]人胰島素基因密碼子優(yōu)化和銀耳內(nèi)源啟動子應(yīng)用[D]. 阮班展.福建農(nóng)林大學(xué) 2013
[4]農(nóng)桿菌介導(dǎo)的香菇遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建[D]. 喻晶晶.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：3002710