光周期敏感性的存在嚴重限制了熱帶、亞熱帶玉米種質(zhì)資源在溫帶地區(qū)的利用,深入了解玉米開花期調(diào)控的遺傳規(guī)律,分離光周期敏感基因,解析其調(diào)控開花期機制,可為玉米區(qū)域適應(yīng)性遺傳改良育種提供理論依據(jù)。本課題組前期通過候選基因關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn),玉米ZmCOL3（C2C2-CO-like-transcription factor 3）與開花期緊密連鎖,但調(diào)控ZmCOL3表達是否可以有效改良玉米開花期至今未知。為此本研究開展以下工作:1.ZmCOL3的獲得和生物信息學(xué)分析。以玉米品種B73為供試材料,獲得ZmCOL3基因CDS。序列分析表明,該基因全長1545bp,共有兩個轉(zhuǎn)錄本,分別命名為ZmCOL3 T01和ZmCOL3 T02,其中轉(zhuǎn)錄本T01存在一個B-box-type zinc finger結(jié)構(gòu)域和CCT（CO,CO-LIKE and TIMING OF CAB1）結(jié)構(gòu)域。生物信息學(xué)預(yù)測,T01可能調(diào)控玉米開花期,并具有細胞核定位功能。2.ZmCOL3的亞細胞定位。構(gòu)建綠色熒光蛋白（green fluorescent protein）基因gfp融合表達載體,利用玉米原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化技術(shù),將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ZmCOL3序列分析

圖 3.2 過表達載體構(gòu)建a：載體圖譜；b：菌液 PCR；c：SpeI 和 SacI 雙酶切Fig.3.2 Overexpression vector constructiona: Vector map; b: PCR detection; c: SpeI and SacI double enzymes RNAi 抑制載體構(gòu)建抑制表達是研究基因功能的另一種有效手段。考慮到很多生物學(xué)表型，本研究進一步構(gòu)建了 ZmCOL3 抑制表達載體米材料。本研究采用的抑制表達策略為 RNAi 技術(shù)。Zm該家族成員核苷酸序列 NCBI Blast（https://blast.ncbi.nlm.似性高達 80％，為有效篩選 RNAi 序列，盡可能的避免脫人工選擇方法，分別選取兩段 200bp 特異性強的靶序列，NAi 抑制載體。干擾片段送生工生物工程（上海）股份有性內(nèi)切酶 SacI 和 SpeI 將兩個干擾片段分別連接到上，獲得重組質(zhì)粒 pCAMBIA3300::RNAi 1 和 pCAMBIA3CR 驗證以及 SpeI 和 SacI 雙酶切驗證：RNAi 1 PCR 產(chǎn)物

圖 3.3 RNAi 抑制載體構(gòu)建b：RNAi 1 菌液 PCR；c：RNAi 2 菌液 PCR；d：SpeI 和 SaFig.3.3 RNAi inhibition vector constructionr map; b: PCR detection of RNAi 1; c: PCR detection of RNAid: SpeI and SacI double enzymes表達載體構(gòu)建及玉米原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化基因家族成員的功能位置多數(shù)都定位到了細胞核，生置同樣在細胞核內(nèi)，為了驗證這一結(jié)果，用限制性內(nèi)切有 gfp 的植物表達載體 pCAMBIA1302 連接，COL3。對重組質(zhì)粒進行 PCR 驗證，1%瓊脂糖凝膠電泳檢peI 雙酶切驗證結(jié)果顯示重組質(zhì)�？汕邢� 1008bp 大小切驗證結(jié)果證實成功構(gòu)建 ZmCOL3 融合表達載體，見表達載體利用原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化技術(shù)轉(zhuǎn)化進入玉米原生質(zhì)生質(zhì)體，發(fā)現(xiàn)在細胞核中有明顯的綠色熒光存在，而

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]水稻多效性基因Ghd7的克隆和功能分析[D]. 翁小煜.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：2993272