在干旱、鹽堿地區(qū)園林綠化植物仍比較缺乏,抗逆植物基因工程育種是豐富多逆境環(huán)境條件下綠化植物的有效快捷途徑之一,其中抗多種非生物脅迫的功能基因的篩選尤為重要。黃耆（Astragalus membranaceus）是抗逆性較強(qiáng)的觀賞和藥用植物資源,在寒冷、干旱和鹽堿地區(qū)具有廣泛的開發(fā)應(yīng)用前景,也是非常好的抗逆基因資源植物。苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia-lyase,PAL）在綠色植物中廣泛存在,作為苯丙烷次生代謝和初級代謝的橋梁,通常對植物的生理代謝和逆境脅迫應(yīng)答有重要作用。本研究對克隆到的黃耆AmPAL基因進(jìn)行了多逆境條件下的表達(dá)特性分析、亞細(xì)胞定位及轉(zhuǎn)AmPAL煙草后代表達(dá)穩(wěn)定性檢驗(yàn)、對煙草形態(tài)發(fā)育的影響;并進(jìn)行了多種非生物脅迫下的抗逆功能解析;通過對同源性較高的煙草NtPAL1蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建進(jìn)一步探討了轉(zhuǎn)AmPAL煙草的抗逆機(jī)理;同時(shí)開展了AmPAL基因在觀賞花卉百合和矮牽牛中的異源轉(zhuǎn)化,以期提高花卉的抗逆性。本研究成果可為今后開展花卉抗逆基因工程育種提供基因資源,也為黃耆抗逆機(jī)理深入研究及開發(fā)利用奠定了理論研究基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.通過RT-PC... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：123 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１?ＰＡＬｓ催化的正向反應(yīng)??

?２?ＡｍＰＡＬ基因表達(dá)特性及蛋白亞細(xì)胞定位???［?ｐＢＩ１２１ＭＣＳ?ＧＦＰ?，１??１３６１３?ｂｐ?ｆ??＼?９５２Ｓ?４０Ｓ４?／??＼?／??＼?／?４９５１??＼?Ｓ�。叮�?５４４５??ｇｇ〇６?ＭＣＳ、ＣａＭＶＳ５Ｓ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ??ＸｂａＪ?５Ｓ１６??—１５Ｓ２Ｓ??Ｚ?／?＼ｘ?Ｓｎｕｔｌ?５Ｓ３０??ＥｃｃＲＩ?６Ｓ３Ｓ?Ｉ?＼?Ｓａｌ！?５Ｓ３３??Ｓ？ｃｌ?６５７１?Ｓｐ＊Ｉ?５Ｓ４１??圖２－１?／＾／／２／Ａ／ＣＳ－Ｇ７＾載體物理圖譜??Ｆｉｇ．２－１?Ｐｈｙｓｉｃａｌ?ｍａｐ?ｏｉｐＢＩ１２１－ＭＣＳ－ＧＦＰ??２．２試驗(yàn)方法??２．２．１加／ＭＬ基因克隆??參照吳松權(quán)基因克隆方法［１７６１??２．２．２構(gòu)建黃耆／ＭＬ系統(tǒng)進(jìn)化樹??將測序獲到的序列進(jìn)行拼接，最后使用ＭＥＧＡ６．０軟件對不同物種的ＰＡＬ??蛋白序列分別進(jìn)行比對，ＮＪ法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹［２５９１。??２．２．３?ｄｍ／ＭＬ基因表達(dá)特性分析??２＿２＿３．１引物設(shè)計(jì)??根據(jù)第二節(jié)克隆得到的Ｊｍ／ＭＺ的ＯＲＦ序列設(shè)計(jì)用于做熒光定量ＰＣＲ的引物０１１�。�??ＡｍＰＡＬＹ．Ｋ），內(nèi)參基因Ａｃｔｉｎｌ所用的引物序列見表２－１。??表２－１熒光定量ＰＣＲ所用引物??Ｔａｂｌｅ?２－１?Ｐｒｉｍｅｒｓ?ｕｓｅｄ?ｆｏｒ?Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ．??引物（Ｐｒｉｍｅｒｓ）?序列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?５’－３’）??（＼ＫＹ￣ＡｍＰＡＬ－￥?ｇｇｔ?ｔｔｃ?ｇｇｔ?ｇｅｔ?ａｃｔ?ｔｃｃ?ｃａ??（＼ＫＹ－ＡｍＰＡＬ－Ｋ?ａｇｅ?ｔｔｔ?ｇｇａ?ｇｔｔ?ａｇｇ?ｔｅｇ?ｇｃ??ｑＲＴ－內(nèi)參引

?２?ＡｍＰＡＬ基因表達(dá)特性及蛋白亞細(xì)胞定位???性分別為?８７．５９?％、８９．１８?％和?５７．３６?％，見圖?２－５。??＇〇?＇１００?：２ＱＱ?：３（Ｘ１?＇４Ｋ３?５００?�。樱耍�?；７ＫＪ??圖２－４黃耆／氨基酸結(jié)構(gòu)域??Ｆｉｇ．２－４Ｔｈｅ?ａｍｉｎｏ?ａｃｉｄ?ｄｏｍａｉｎ?ＡｍＰＡＬ???Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍｐｒａｔｅｎｓｅ?????Ｍｅｄｌｃａｇｏ?ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ?????Ｃｉｃｅｒ?ａｒｉｅｔｉｎｕｍ?????？Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ?ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ???Ｌｕｐｉｎｕｓ?ａｎｇｕｓｔｉｆｏｉｉｕｓ???Ｃａｊａｎｕｓ?ｃａｊａｎ???Ｖｉｇｎａ?ｒａｄｉａｔａ?ｖａｒ．?ｒａｄｉａｔａ???Ｐｈａｓｅｏｉｕｓ?ｖｕｌｇａｒｉｓ?????Ｇｌｙｃｉｎｅ?ｍａｘ???Ｃａｊａｎｕｓ?ｃａｊａｎ（２）???Ａｒａｃｈｉｓ?ｄｕｒａｎｅｎｓｉｓ???Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ?ｔｈａｌｉａｎａ???Ｖｉｇｎａ?ｒａｄｉａｔａ???Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ?ｏｎｅｉｄｅｎｓｉｓ???Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ?ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ???Ｄｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ?ｄｉｓｃｏｉｄｅｕｍ??圖２－５加／ＭＺ■與其他物種／ＭＩ氨基酸進(jìn)化樹分析??基于氨基酸序列的系統(tǒng)發(fā)育樹。本文報(bào)道的代表性序列由？標(biāo)記，由鄰接分析確定。序列的來源在物??種的每個(gè)拉丁名稱之后表示。比例條表示序列的估計(jì)散度為５％。??Ｆｉｇ．２－５?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?ｔｒｅｅ?ｂａｓｅｄ?ｏｎ?ａｍｉｎｏ?ａｃｉｄ?ａｌｉｇｎｍｅｎｔ?ｆｏｘ?ＡｍＰＡＬ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｐｅｃｉｅ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山葡萄PAL基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)蛋白純化[J]. 陳蒙,袁赫海,張宇,劉海峰.  安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(05)
[2]兩種鹽脅迫對苦楝幼苗光合特性的影響[J]. 吳孝紅,胡鑫,汪貴斌,曹福亮,郁萬文.  北方園藝. 2019(20)
[3]低溫脅迫對玉米種子萌發(fā)和幼苗活力的影響[J]. 崔婷茹,范志強(qiáng),郭晉杰.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(10)
[4]鹽脅迫對6種草地早熟禾幼苗生理特性的影響[J]. 劉燕,楊偉,馬暉玲,陳彥碩,楊乾.  甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(05)
[5]鹽堿脅迫對龍葵種子萌發(fā)及幼苗生長的影響[J]. 于爽,高劍,楊新宇,王春雪,冀屹.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(17)
[6]探討干旱區(qū)鹽堿地生態(tài)治理關(guān)鍵技術(shù)[J]. 杜文娟.  農(nóng)家參謀. 2019(18)
[7]環(huán)境因素對黃芪產(chǎn)量和品質(zhì)的影響[J]. 孫海,金橋,吳虎平,邵財(cái),張亞玉.  特產(chǎn)研究. 2019(03)
[8]不同來源黃芪總黃酮含量測定及其抗氧化活性研究[J]. 胡曉安,周志云,吳晗,趙冉,馬莉.  世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2019(64)
[9]水稻耐鹽堿的生理機(jī)制及育種策略[J]. 姚棟萍,吳俊,胡忠孝,柏斌,莊文,李建武,鄧啟云.  雜交水稻. 2019(04)
[10]百喜草根、葉在持續(xù)干旱脅迫下的生理響應(yīng)（英文）[J]. 張宇君,趙麗麗,王普昶,張雄,丁磊磊.  Agricultural Science & Technology. 2019(02)

博士論文
[1]小麥TaGF14b和二穗短柄草BdGF14a基因的抗逆功能研究[D]. 張揚(yáng).華中科技大學(xué) 2018
[2]外源脫落酸對水稻（Oryza sativa L.）鹽堿脅迫的誘抗效應(yīng)及其生理機(jī)制[D]. 魏立興.中國科學(xué)院研究生院（東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所） 2015
[3]水稻紋枯病菌蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)模型的建立及致病轉(zhuǎn)錄因子STE12的克隆與功能驗(yàn)證[D]. 丁磊.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]水稻（OryzasativaL.）應(yīng)對鹽堿脅迫的生理及分子機(jī)制研究[D]. 呂丙盛.中國科學(xué)院研究生院（東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所） 2014
[5]沙棗對氯化鈉和硫酸鈉脅迫差異性響應(yīng)的生理機(jī)制[D]. 劉正祥.中國林業(yè)科學(xué)研究院 2013
[6]松嫩平原鹽堿脅迫對目的園林植物生理生態(tài)學(xué)影響[D]. 閆永慶.東北林業(yè)大學(xué) 2010
[7]膜莢黃芪不定根培養(yǎng)及苯丙氨酸解氨酶（PAL）基因的克隆與功能鑒定[D]. 吳松權(quán).東北林業(yè)大學(xué) 2008
[8]鹽堿脅迫下水稻OsAPX家族基因表達(dá)特性差異研究[D]. 管清杰.東北林業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]新疆北塔山地區(qū)植物區(qū)系與植物資源研究[D]. 李珊珊.石河子大學(xué) 2017
[2]紫花苜蓿MsSOS3基因的克隆及其功能研究[D]. 張軍.哈爾濱師范大學(xué) 2016
[3]不同供氮水平條件下鹽脅迫對水稻光合及生理特性的影響[D]. 劉曉龍.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]藥用黃芪ISSR遺傳多樣性分析[D]. 張茹.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[5]主要逆境條件下煙草維生素B6存在形態(tài)的變化[D]. 王靈紅.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[6]擬南芥磷脂酶PLP9基因相關(guān)突變體的表型鑒定[D]. 張鵬.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]秋水仙素和氮離子對蒙古黃芪多倍體誘導(dǎo)的影響及其適應(yīng)機(jī)理的探討[D]. 張利珍.內(nèi)蒙古大學(xué) 2011
[8]NaCl脅迫下苯丙烯酸在黃瓜幼苗—土壤間的動(dòng)態(tài)變化[D]. 王穎.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[9]不同小麥品種耐鹽差異的生理生化機(jī)制研究[D]. 張敏.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[10]高山紅景天苯丙氨酸解氨酶基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 高東堯.吉林大學(xué) 2006



本文編號：2992550