研究背景:肌萎縮側(cè)索硬化癥（Amyotrophic lateral sclerasis,ALS）是一種主要損傷人類的大腦皮層、腦干和脊髓運動神經(jīng)元的神經(jīng)性退行性疾病。這些部位的運動神經(jīng)元受到損傷時,它們會失去與肌肉或者腺體的連接,控制的肌肉出現(xiàn)肌束震顫,導(dǎo)致肌肉自發(fā)性抽搐,最終出現(xiàn)萎縮。肌萎縮側(cè)索硬化癥發(fā)病通常始于四肢,多在確認患病的3⁵年內(nèi)死于呼吸系統(tǒng)衰竭。臨床上根據(jù)其病理將肌萎縮側(cè)索硬化癥分為散發(fā)性肌萎縮側(cè)索硬化癥（Sporadic Amyotrophic lateral sclerosis,SALS）和家族性肌萎縮側(cè)索硬化癥（Family Amyotrophic lateral sclera-sis,FALS）兩種類型,其中家族型肌萎縮側(cè)索硬化癥（FALS）約占所有ALS的10%左右,遺傳方式多數(shù)為常染色體顯性遺傳,少數(shù)是X連鎖或常染色體隱性遺傳。目前對于ALS的致病機理仍然不是很清楚,臨床上也缺乏有效的治療手段,唯一有效的藥物-力如太,也只能提高病人的生活質(zhì)量,延長3個月左右的壽命。近年來,很多ALS的疾病模型被建立,其中主要包括果蠅、嚙齒類和豬等模型,這... 

【文章來源】：昆明理工大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

自1990年以來的ALS基因發(fā)現(xiàn)該每個圓圈的大小反映了所有家族性ALS病例的相關(guān)比例使用該基因（例如，SOD1為20％，

36圖2hSOD1G93A轉(zhuǎn)基因猴組織原代建系A(chǔ).組織建系后的第4天；B.P1代細胞第2天；C.P1代細胞第5天。比例尺100um。Figure2EstablishhSOD1G93Atransgenicmonkeyfibroblastlines.A.Day4afterthetransgenicmonkeyeartissueadherent.B.Day2ofnewlygeneratedfibroblastsinP1.C.Day5ofnewlygeneratedfibroblastsinP1.scalebar：100um利用EDTA-Na2的采血管，采取食蟹猴新鮮血液1~2ml和成纖維細胞約(1*105)進行DNA的提取，分別檢測6只食蟹猴的DNA水平突變基因hSOD1G93A的插入情況。血液和成纖維細胞DNA除了在處理樣品稍有不同外，提取的方法大體相同。根據(jù)插入突變基因hSOD1G93A的cDNA，用NCBI或者primer5進行合適的引物設(shè)計。正式實驗之前，利用梯度PCR找到目的基因合適的退火溫度（Tm）和延伸時間，進行基因組DNAPCR擴增，檢測基因hSOD1G93A的在猴子體內(nèi)的插入情況。目的基因擴增后，將PCR反應(yīng)產(chǎn)物進行電泳檢測和PCR產(chǎn)物進行純化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：6只轉(zhuǎn)基因電泳均有條帶；同正常hSOD1片段進行比對，發(fā)現(xiàn)6只小猴均成功插入hSOD1G93A基因。如圖(圖2，A,B)。圖3hSOD1G93A轉(zhuǎn)基因猴耳朵及血液的基因組PCR及產(chǎn)物的測序A.6只轉(zhuǎn)基因猴和三只野生型的DNA的擴增，插入片段的大小是400bp左右.B.6只轉(zhuǎn)基因猴和正常基因的測序比對。

36圖2hSOD1G93A轉(zhuǎn)基因猴組織原代建系A(chǔ).組織建系后的第4天；B.P1代細胞第2天；C.P1代細胞第5天。比例尺100um。Figure2EstablishhSOD1G93Atransgenicmonkeyfibroblastlines.A.Day4afterthetransgenicmonkeyeartissueadherent.B.Day2ofnewlygeneratedfibroblastsinP1.C.Day5ofnewlygeneratedfibroblastsinP1.scalebar：100um利用EDTA-Na2的采血管，采取食蟹猴新鮮血液1~2ml和成纖維細胞約(1*105)進行DNA的提取，分別檢測6只食蟹猴的DNA水平突變基因hSOD1G93A的插入情況。血液和成纖維細胞DNA除了在處理樣品稍有不同外，提取的方法大體相同。根據(jù)插入突變基因hSOD1G93A的cDNA，用NCBI或者primer5進行合適的引物設(shè)計。正式實驗之前，利用梯度PCR找到目的基因合適的退火溫度（Tm）和延伸時間，進行基因組DNAPCR擴增，檢測基因hSOD1G93A的在猴子體內(nèi)的插入情況。目的基因擴增后，將PCR反應(yīng)產(chǎn)物進行電泳檢測和PCR產(chǎn)物進行純化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：6只轉(zhuǎn)基因電泳均有條帶；同正常hSOD1片段進行比對，發(fā)現(xiàn)6只小猴均成功插入hSOD1G93A基因。如圖(圖2，A,B)。圖3hSOD1G93A轉(zhuǎn)基因猴耳朵及血液的基因組PCR及產(chǎn)物的測序A.6只轉(zhuǎn)基因猴和三只野生型的DNA的擴增，插入片段的大小是400bp左右.B.6只轉(zhuǎn)基因猴和正常基因的測序比對。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]無血清培養(yǎng)人胚胎干細胞的體系研究與進展[J]. 張哲,曾憲卓,魯菲,郭明輝,董慧君.  中國組織工程研究. 2015(41)



本文編號：2991597