發(fā)布時(shí)間：2021-01-21 04:29

　　目的研究使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時(shí)目的基因大小對轉(zhuǎn)染效率影響。方法將大小差異顯著的目的基因連接到同一載體,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別將上述兩種目的基因轉(zhuǎn)染至FRT細(xì)胞,轉(zhuǎn)染完成24 h后,應(yīng)用倒置熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀分析轉(zhuǎn)染效率,檢測目的基因的大小對轉(zhuǎn)染效率的影響。結(jié)果轉(zhuǎn)染效率均隨著脂質(zhì)體用量增加而上升,無論脂質(zhì)體濃度如何選擇,兩種真核表達(dá)載體的轉(zhuǎn)染效率均有顯著性差異,且目的基因越大,轉(zhuǎn)染效率越低。結(jié)論目的基因與轉(zhuǎn)染效率成反比。 

【文章來源】：吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào). 2020,41(04)

【文章頁數(shù)】：3 頁

【部分圖文】：

倒置熒光顯微鏡觀測轉(zhuǎn)染結(jié)果

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染因操作簡單且不需要特殊儀器設(shè)備而被廣泛接受[3],目的基因的大小被認(rèn)為對轉(zhuǎn)染效率有較明顯的影響[4]。轉(zhuǎn)染時(shí),不管實(shí)際使用的載體如何,轉(zhuǎn)染試劑說明書給出的方法都是相同的,但是實(shí)際操作時(shí),不同的目的基因轉(zhuǎn)染時(shí)的效率不同。而轉(zhuǎn)染效率越高,后續(xù)獲得陽性克隆的概率越大。本研究選用連接在相同載體上啟動(dòng)子相同而目的基因大小不等的兩種真核表達(dá)載體ANO1-EGFP/pcDNA3.1和YFP/pcDNA3.1,梯度設(shè)置脂質(zhì)體用量,選取易于轉(zhuǎn)染的FRT細(xì)胞進(jìn)行研究。ANO1-EGFP/pcDNA3.1和YFP/pcDNA3.1均表達(dá)熒光,便于實(shí)驗(yàn)的觀察和檢測。構(gòu)建的載體中,ANO1大小為2871 bp,EGFP大小為720 bp,YFP大小為720 bp[5-6],可以知道ANO1-EGFP大小顯著大于YFP,在相同實(shí)驗(yàn)條件下檢測得YFP的轉(zhuǎn)染效率高于ANO1-EGFP的轉(zhuǎn)染效率。因此,本研究證實(shí),無論脂質(zhì)體用量如何,目的基因大小影響用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時(shí)的效率,且目的基因越大,轉(zhuǎn)染效率越低。研究結(jié)果對于今后脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染工作具有指導(dǎo)作用,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑說明書并沒有考慮到目的基因的大小,而不同大小的目的基因使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時(shí)結(jié)果差異較大。而轉(zhuǎn)染效率越高,后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也會(huì)更好[7],并且瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率越高,后續(xù)篩選時(shí)獲得陽性克隆的概率越大。所以在不損傷細(xì)胞的情況下,目的基因較大時(shí),脂質(zhì)體用量可以適當(dāng)增加。后續(xù)研究可以針對不同的細(xì)胞對脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是否有影響,以及確定多大量的脂質(zhì)體會(huì)對細(xì)胞產(chǎn)生毒害作用。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]YFP-H148Q/I152L在FRT細(xì)胞中的表達(dá)及其對碘離子敏感特性的研究[J]. 鄭鍇,朱杭飛,王長文,郭素紅,李正祎,藏雨軒,張雲(yún)喬,鄭巖,方芳,郝峰.  中國獸醫(yī)雜志. 2015(10)
[2]anoctamin 1在中國倉鼠卵巢細(xì)胞中的表達(dá)及其離子通道特性[J]. 郝峰,王皓,許會(huì)靜,方青,張麗,朱杭飛,張雲(yún)喬,鞠曉紅.  吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2014(06)
[3]誘導(dǎo)K562細(xì)胞分化對EDAG基因表達(dá)的影響[J]. 方芳,陳忠航,張宸豪,許望翔,馬愛新.  吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào). 2005(04)



本文編號：2990460