目的:探索在早期動(dòng)脈粥樣硬化小鼠頸動(dòng)脈損傷模型中,血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）修飾的小鼠巨噬細(xì)胞是否可以作為VEGF的載體將VEGF定向輸送到受損血管部位,促進(jìn)損傷內(nèi)皮的修復(fù)、抑制內(nèi)膜增生,并探討其相關(guān)機(jī)制。方法:1.細(xì)胞實(shí)驗(yàn):傳代培養(yǎng)本實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建并經(jīng)鑒定的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系VEGF-RAW264.7(同時(shí)轉(zhuǎn)染人VEGF₁₆₅和綠色熒光蛋白ZsGreen1基因)、轉(zhuǎn)染對照組ZsGreen1-RAW264.7（僅轉(zhuǎn)染ZsGreen1）及未轉(zhuǎn)染組RAW264.7細(xì)胞。將各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液,通過Griess法檢測一氧化氮（nitric oxide,NO）的產(chǎn)量;通過Western Blot檢測各組的細(xì)胞中趨化因子受體2（chemokine receptor type 2,CCR2）和趨化因子受體5（chemokine receptor type5,CCR5）蛋白的表達(dá)情況,以此初探各組細(xì)胞在內(nèi)膜募集數(shù)量存在差異的機(jī)制。2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):使用金屬導(dǎo)絲制造ApoE基因缺陷型(ApoE<... 

【文章來源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文對照表（Abbreviations）
前言
1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    1.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 細(xì)胞系的建立及分組
    2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.2.2 細(xì)胞傳代
        2.2.3 細(xì)胞凍存
        2.2.4 細(xì)胞樣本的制備
    2.3 小鼠頸動(dòng)脈損傷模型的建立及實(shí)驗(yàn)分組
    2.4 小動(dòng)物活體成像儀（IVIS）動(dòng)脈成像
    2.5 免疫熒光染色及再內(nèi)皮化率評估
    2.6 H&E 染色及新生內(nèi)膜增生的統(tǒng)計(jì)
    2.7 NO產(chǎn)量的檢測
    2.8 Western Blot實(shí)驗(yàn)
        2.8.1 蛋白的提取及濃度測定
        2.8.2 上樣蛋白液的體系及蛋白變性
        2.8.3 配膠
        2.8.4 電泳
        2.8.5 電轉(zhuǎn)
        2.8.6 封閉及抗體孵育
        2.8.7 顯影及圖像分析
3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4 結(jié)果
    4.1 注射的細(xì)胞在動(dòng)脈內(nèi)膜的分布
    4.2 VEGF-RAW264.7 加速損傷動(dòng)脈的再內(nèi)皮化并直接參與新內(nèi)皮的形成
-/-小鼠血管損傷后新內(nèi)膜形成">    4.3 VEGF-RAW264.7 細(xì)胞治療抑制Apo E^-/-小鼠血管損傷后新內(nèi)膜形成
    4.4 VEGF-RAW264.7細(xì)胞治療提高受損頸動(dòng)脈局部VEGF濃度
    4.5 VEGF-RAW264.7細(xì)胞中NO產(chǎn)量增加
    4.6 VEGF‐RAW264.7 細(xì)胞中CCR2 表達(dá)無變化,CCR5 表達(dá)上調(diào)
5 討論與展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目



本文編號：2990061