發(fā)布時(shí)間：2021-01-20 00:33

　　目的:體外培養(yǎng)大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞（rat bone marrow stromal cells,rBMSCs）,構(gòu)建攜帶人牙骨質(zhì)蛋白（cementum?protein,CEMP）1基因的慢病毒載體并轉(zhuǎn)染rBMSCs,探討CEMP1基因修飾對(duì)rBMSCs生物學(xué)行為的影響。方法:1.全骨髓貼壁法體外分離培養(yǎng)rBMSCs,通過(guò)成骨和成脂分化能力以及細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)rBMSCs進(jìn)行鑒定;2.構(gòu)建含人CEMP1基因的重組慢病毒過(guò)表達(dá)載體,通過(guò)RT-PCR及基因測(cè)序?qū)χ亟M載體進(jìn)行鑒定;3.通過(guò)熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞熒光表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,RT-PCR、Real-time PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)和Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞CEMP1基因和蛋白的表達(dá)情況;4.通過(guò)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后rBMSCs的成牙骨質(zhì)相關(guān)基因表達(dá),探討CEMP1基因修飾對(duì)rBMSCs的影響。結(jié)果:1.成功分離培養(yǎng)rBMSCs;流式細(xì)胞術(shù)顯示細(xì)胞高表達(dá)CD29和CD90;2.rBMSCs成骨誘導(dǎo)21 d,茜素紅染色可見(jiàn)紅染的礦化結(jié)節(jié);成脂誘導(dǎo)21 d,油紅O染色可見(jiàn)紅染的空泡樣脂滴;3.RT-PCR及基因測(cè)序證實(shí)成功構(gòu)建... 

【文章來(lái)源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

rBMSCs培養(yǎng)形態(tài)學(xué)觀察A：rBMSCs原代培養(yǎng)3d(×200)；B：rBMSCs原代培養(yǎng)7d(×200)；C：rBMSCs原代培養(yǎng)

圖 1-2 流式細(xì)胞術(shù)鑒定 rBMSCs 表面標(biāo)志物A：CD29；B：CD31；C：CD45；D：CD90Fig.1-2 Detection of rBMSCs surface markers by flow cytometryA: CD29 B: CD31 C: CD45 D: CD901.3 成骨分化能力檢測(cè)成骨誘導(dǎo)后第 7 d，rBMSCs 細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯改變，生長(zhǎng)密集、重疊，呈鋪路石樣外觀，可見(jiàn)逐漸形成的結(jié)節(jié)狀結(jié)構(gòu)。成骨誘導(dǎo)第 21 d，鏡下可見(jiàn)白色的礦化結(jié)節(jié)，細(xì)胞以結(jié)節(jié)為中心密集生長(zhǎng)（圖 1-3A），茜素紅染色可見(jiàn)紅染的、散在的、大小不一的礦化結(jié)節(jié)（圖 1-3B）。

圖 1-2 流式細(xì)胞術(shù)鑒定 rBMSCs 表面標(biāo)志物A：CD29；B：CD31；C：CD45；D：CD90Fig.1-2 Detection of rBMSCs surface markers by flow cytometryA: CD29 B: CD31 C: CD45 D: CD90分化能力檢測(cè)導(dǎo)后第 7 d，rBMSCs 細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯改變，生長(zhǎng)密集、重疊，可見(jiàn)逐漸形成的結(jié)節(jié)狀結(jié)構(gòu)。成骨誘導(dǎo)第 21 d，鏡下可見(jiàn)白胞以結(jié)節(jié)為中心密集生長(zhǎng)（圖 1-3A），茜素紅染色可見(jiàn)紅染的一的礦化結(jié)節(jié)（圖 1-3B）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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