目的:原發(fā)性肝癌被預(yù)測(cè)為2018年全球第六大最常被診斷癌癥和全球第四大癌癥死亡原因,肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）被認(rèn)為是原發(fā)性肝癌的最常見(jiàn)形式。大多數(shù)HCC患者表現(xiàn)為晚期,為了開(kāi)發(fā)HCC患者治療的新策略,對(duì)HCC發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中涉及的分子機(jī)制的探究是必要的。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（vascular endothelial growth factor A,VEGFA）是血管生成的關(guān)鍵調(diào)控因子,抗血管生成療法在肝癌治療中的作用已被公認(rèn),對(duì)HCC中影響VEGFA表達(dá)的分子機(jī)制的研究十分必要。泛素特異肽酶22（ubiquitin specific peptidase 22,USP22）是去泛素化酶（de-ubiquitylation enzymes,DUBs）家族的一員,在HCC中,USP22起促癌作用,但具體機(jī)制尚不明確。本研究探討了USP22調(diào)節(jié)VEGFA轉(zhuǎn)錄的分子機(jī)制及其對(duì)HCC細(xì)胞生長(zhǎng)、腫瘤發(fā)生和血管生成擬態(tài)的影響,為HCC治療及靶點(diǎn)的探索提供新思路。研究方法:1、Western blot法檢測(cè)USP22及VEDFA蛋白在HCC組織中表達(dá)情況,Pe... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

USP22及VEGFA在HCC組織中高表達(dá)且呈正相關(guān)A:35對(duì)HCC癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織USP22及VEGFA蛋白表達(dá)情況Westernblot條帶；B:USP22及VEGFA蛋白表達(dá)情況柱狀圖；C:USP22與VEGFA蛋白表達(dá)情況Pearson相關(guān)性

沉默USP22減少VEGFA和HIF-1α蛋白表達(dá)及VEGFAmRNA表達(dá)A：沉默USP22后VEGFA和HIF-1α蛋白表達(dá)情況；B：沉默USP22后VEGFA和HIF-1αmRNA表達(dá)情況；Cocl2表示氯化鈷，抑制脯氨酰基羥化酶，模擬缺氧環(huán)境；數(shù)據(jù)以均數(shù)±

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位29進(jìn)一步通過(guò)CHX實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證缺氧條件下USP22對(duì)HIF-1α蛋白的穩(wěn)定作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)于siNC組，與未加CHX處理的細(xì)胞相比，加入CHX處理0.5h和1h的細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；對(duì)于siUSP22組，與未加CHX處理的細(xì)胞相比，加入CHX處理0.5h和1h的細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與加入CHX處理0.5h的細(xì)胞相比，加入CHX處理1h的細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與siNC組未加CHX處理時(shí)的細(xì)胞相比，siUSP22組未加CHX處理時(shí)的細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且與siNC組HIF-1α蛋白表達(dá)隨CHX處理降低的速度相比，siUSP22組HIF-1α蛋白表達(dá)隨CHX處理降低的速度較快（圖4）。以上結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)USP22在缺氧條件下穩(wěn)定HIF-1α蛋白表達(dá)，且這一作用不是通過(guò)抑制細(xì)胞合成實(shí)現(xiàn)的，提示我們這一作用可能與抑制蛋白降解有關(guān)。圖4缺氧條件下USP22穩(wěn)定HIF-1αA：CHX實(shí)驗(yàn)Westernblot條帶圖；B：HIF-1α蛋白表達(dá)柱狀圖；CHX表示放線菌酮，一種蛋白合成抑制劑；Cocl2表示氯化鈷，抑制脯氨酰基羥化酶，模擬缺氧環(huán)境；數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（n=3），組間比較采用單因素方差分析及Tukey檢驗(yàn)；*表示P<0.05。3.5缺氧條件下USP22對(duì)HIF-1α有去泛素化作用我們想進(jìn)一步驗(yàn)證USP22穩(wěn)定HIF-1α是否與USP22的去泛素化作用抑制蛋白降解相關(guān)。我們通過(guò)泛素化的Co-IP實(shí)驗(yàn)，轉(zhuǎn)染His-ubiquitin質(zhì)粒及加入MG132抑制泛素蛋白降解，通過(guò)Co-IP實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證USP22對(duì)HIF-1α蛋白是否有去泛素化作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與siNC組相比，siUSP22組HIF-1α蛋白泛素化水平增加，表明缺氧條件下沉默USP22可以促進(jìn)HIF-1α蛋白泛素化，即缺氧條件下USP22對(duì)HIF-

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]泛素-蛋白酶體系統(tǒng)與精子DNA損傷修復(fù)的研究進(jìn)展[J]. 張國(guó)巍,蔡鴻財(cái),商學(xué)軍.  中華男科學(xué)雜志. 2016(09)



本文編號(hào)：2984439