光核桃（Aygdalus wira Koehne）又叫“康布”（藏語）,是薔薇科桃屬落葉喬木,原產(chǎn)中國西藏,具有耐干旱、耐貧瘠和抗病害等特征,是我國特有野生桃種,壽命可達千年,為我國Ⅱ級保護植物,集觀賞、藥用和食用等多用途于一身,具有較高的生態(tài)效益和經(jīng)濟價值。本研究克隆了西藏光核桃DNA修復蛋白基因（radiation sensitivity protein-23,Rad23）,研究了光核桃干旱脅迫條件下AnzRad23d基因的表達模式;同時對AmRad23d基因進行生物信息學預測及亞細胞定位;構建了原核表達載體對AmRad23d蛋白進行體外表達與純化;同時構建了植物過表達載體對擬南芥進行了異源表達研究。結果如下:1.利用3月齡光核桃為試驗材料,克隆了AmRad23 基因,分析了干旱脅迫下AmRad23d基因在光核桃葉片和根中的表達模式,發(fā)現(xiàn):干旱脅迫下,AmRad23d基因表達量增高,尤其在葉片中表達量較高。2.對克隆成功的光核桃AmRad23d基因進行生物信息學預測,發(fā)現(xiàn):AmRad23d基因的開放閱讀框序列（ORF）全長為1158bp,編碼385個氨基酸,蛋白質相對分子質量大小預... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２干旱脅迫光核桃葉片的生長狀態(tài)??注：ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ分別為干旱０、４、８、１２、１６天對照（左）和干旱處理（右）的光核桃，ｆ??

２．３．１?３基因的克隆??以控水處理后的光核桃葉片ｃＤＮＡ為模板，利用Ｐｒｉｍｅｄ設計的引物進行擴增，電??泳結果顯示大于ｌｋｂ的目的條帶（圖２－０。將片段回收連接Ｔ－載體后轉入大腸桿菌感受??態(tài)ＤＨ５ａ，提質粒測序獲得目的基因Ｚｗ辦必如全長為１１５８ｂｐ。??＾ＩＡｍＲａｄ２３ｄ??１鬮啊??圖２－１光核桃葉片基因如／＾２３＾的擴增結果。??注：Ｍ?為?ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００，?ＡｍＲａｄ２３ｄ?為?ＰＣＲ?產(chǎn)物??２．３．２?基因在干旱脅迫下的表達分析??植物在受到控水處理后其自身形態(tài)上會發(fā)生變化，如圖２－２所示，在Ｏｄ、８ｄ時，??觀察實驗組和對照組葉片生長狀態(tài)相似，在干旱至１２ｄ時，實驗組葉片開始發(fā)生卷曲、??萎蔫。在第１６ｄ時葉片卷曲萎蔫最為嚴重，在復水４ｄ后，實驗組與對照組光核桃均正??常生長，但實驗組的植株的株高顯著低于對照組，干旱使光核桃的生長情況受影響。同??時對控水處理的光核桃根系結構進行形態(tài)觀察，如圖２－３所示，在Ｏｄ、８ｄ時，觀察實??驗組和對照組根系結構狀態(tài)相似

注：ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ分別為干旱０、４、８、１２、１６天對照（左）和干旱處理（右）的光核桃??根，ｆ為復水后的光核桃根部??對控水處理下光核桃葉片基因的表達定量分析，如圖２－４Ａ所示，在光??核桃在控水處理中，基因表達量呈先升高后降低，與０ｄ相比，在第１２ｄ時表達量顯著??增高了?１６倍，隨干旱時間增加表達量下降。同時對干旱脅迫下光核桃根部??基因的表達定量分析，如圖２－４Ｂ所示，基因表達量呈先升高后下降又逐漸上升，但差??異不明顯。表明在干旱脅迫時，基因在葉中響應明顯。??＝？〇?＊＊??Ｓ?７?０???？２?Ａ?丁?－２?２＊°?Ｂ???卜一＾——ｔ??Ｚ?２ｔ?＾??Ｚ?１－０?■?■－??１?；ｗｗｌ＃ｗ?ｉ??０?８?１２?１６?２０?０?８?１２?１６?２０??Ｔｉｍｅ?（Ｄａｙｓ）?Ｔｉｍｅ?（Ｄａｙｓ）??圖２－４干旱脅迫下光核桃葉片和根的基因表達量分析??對ＵＶ脅迫下光核桃葉片基因的表達定量分析，如圖２－５所示，??Ｗ２如基因的表達呈先降低后增高趨勢。???０?６?１２??Ｔｉｍｅ?（ｈ）??圖２－５光核桃紫外脅迫下光核桃葉片基因表達量分析??－８－??

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：2977128