光核桃（Aygdalus wira Koehne）又叫“康布”（藏語(yǔ)）,是薔薇科桃屬落葉喬木,原產(chǎn)中國(guó)西藏,具有耐干旱、耐貧瘠和抗病害等特征,是我國(guó)特有野生桃種,壽命可達(dá)千年,為我國(guó)Ⅱ級(jí)保護(hù)植物,集觀賞、藥用和食用等多用途于一身,具有較高的生態(tài)效益和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本研究克隆了西藏光核桃DNA修復(fù)蛋白基因（radiation sensitivity protein-23,Rad23）,研究了光核桃干旱脅迫條件下AnzRad23d基因的表達(dá)模式;同時(shí)對(duì)AmRad23d基因進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè)及亞細(xì)胞定位;構(gòu)建了原核表達(dá)載體對(duì)AmRad23d蛋白進(jìn)行體外表達(dá)與純化;同時(shí)構(gòu)建了植物過(guò)表達(dá)載體對(duì)擬南芥進(jìn)行了異源表達(dá)研究。結(jié)果如下:1.利用3月齡光核桃為試驗(yàn)材料,克隆了AmRad23 基因,分析了干旱脅迫下AmRad23d基因在光核桃葉片和根中的表達(dá)模式,發(fā)現(xiàn):干旱脅迫下,AmRad23d基因表達(dá)量增高,尤其在葉片中表達(dá)量較高。2.對(duì)克隆成功的光核桃AmRad23d基因進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn):AmRad23d基因的開(kāi)放閱讀框序列（ORF）全長(zhǎng)為1158bp,編碼385個(gè)氨基酸,蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量大小預(yù)... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２干旱脅迫光核桃葉片的生長(zhǎng)狀態(tài)??注：ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ分別為干旱０、４、８、１２、１６天對(duì)照（左）和干旱處理（右）的光核桃，ｆ??

２．３．１?３基因的克隆??以控水處理后的光核桃葉片ｃＤＮＡ為模板，利用Ｐｒｉｍｅｄ設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行擴(kuò)增，電??泳結(jié)果顯示大于ｌｋｂ的目的條帶（圖２－０。將片段回收連接Ｔ－載體后轉(zhuǎn)入大腸桿菌感受??態(tài)ＤＨ５ａ，提質(zhì)粒測(cè)序獲得目的基因Ｚｗ辦必如全長(zhǎng)為１１５８ｂｐ。??＾ＩＡｍＲａｄ２３ｄ??１鬮啊??圖２－１光核桃葉片基因如／＾２３＾的擴(kuò)增結(jié)果。??注：Ｍ?為?ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００，?ＡｍＲａｄ２３ｄ?為?ＰＣＲ?產(chǎn)物??２．３．２?基因在干旱脅迫下的表達(dá)分析??植物在受到控水處理后其自身形態(tài)上會(huì)發(fā)生變化，如圖２－２所示，在Ｏｄ、８ｄ時(shí)，??觀察實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組葉片生長(zhǎng)狀態(tài)相似，在干旱至１２ｄ時(shí)，實(shí)驗(yàn)組葉片開(kāi)始發(fā)生卷曲、??萎蔫。在第１６ｄ時(shí)葉片卷曲萎蔫最為嚴(yán)重，在復(fù)水４ｄ后，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組光核桃均正??常生長(zhǎng)，但實(shí)驗(yàn)組的植株的株高顯著低于對(duì)照組，干旱使光核桃的生長(zhǎng)情況受影響。同??時(shí)對(duì)控水處理的光核桃根系結(jié)構(gòu)進(jìn)行形態(tài)觀察，如圖２－３所示，在Ｏｄ、８ｄ時(shí)，觀察實(shí)??驗(yàn)組和對(duì)照組根系結(jié)構(gòu)狀態(tài)相似

注：ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ分別為干旱０、４、８、１２、１６天對(duì)照（左）和干旱處理（右）的光核桃??根，ｆ為復(fù)水后的光核桃根部??對(duì)控水處理下光核桃葉片基因的表達(dá)定量分析，如圖２－４Ａ所示，在光??核桃在控水處理中，基因表達(dá)量呈先升高后降低，與０ｄ相比，在第１２ｄ時(shí)表達(dá)量顯著??增高了?１６倍，隨干旱時(shí)間增加表達(dá)量下降。同時(shí)對(duì)干旱脅迫下光核桃根部??基因的表達(dá)定量分析，如圖２－４Ｂ所示，基因表達(dá)量呈先升高后下降又逐漸上升，但差??異不明顯。表明在干旱脅迫時(shí)，基因在葉中響應(yīng)明顯。??＝？〇?＊＊??Ｓ?７?０???？２?Ａ?丁?－２?２＊°?Ｂ???卜一＾——ｔ??Ｚ?２ｔ?＾??Ｚ?１－０?■?■－??１?；ｗｗｌ＃ｗ?ｉ??０?８?１２?１６?２０?０?８?１２?１６?２０??Ｔｉｍｅ?（Ｄａｙｓ）?Ｔｉｍｅ?（Ｄａｙｓ）??圖２－４干旱脅迫下光核桃葉片和根的基因表達(dá)量分析??對(duì)ＵＶ脅迫下光核桃葉片基因的表達(dá)定量分析，如圖２－５所示，??Ｗ２如基因的表達(dá)呈先降低后增高趨勢(shì)。???０?６?１２??Ｔｉｍｅ?（ｈ）??圖２－５光核桃紫外脅迫下光核桃葉片基因表達(dá)量分析??－８－??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]擬南芥泛素連接酶RING1A參與ABA信號(hào)途徑的調(diào)控[J]. 張峻川,張力,李蘇迪,石武良.  福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2018(02)
[2]基于SSR標(biāo)記的西藏光核桃群體遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)分析[J]. 包文泉,烏云塔娜,杜紅巖,李鐵柱,劉慧敏,王淋,白玉娥.  林業(yè)科學(xué). 2018(02)
[3]西藏地區(qū)不同種源光核桃的抗旱性比較研究[J]. 黃鑫,孟凡娟,李靜,羅秋香,權(quán)紅.  遼寧林業(yè)科技. 2018(01)
[4]西藏光核桃表型性狀遺傳多樣性分析[J]. 包文泉,烏云塔娜,杜紅巖,李鐵柱,劉慧敏,白玉娥.  分子植物育種. 2018(16)
[5]草莓FaMRLK47蛋白原核表達(dá)條件優(yōu)化[J]. 張卿,邢宇,曹慶芹,秦嶺.  北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào). 2018(01)
[6]白樺BpUVR8基因的序列與表達(dá)模式分析[J]. 李曉一,詹亞光,婁曉瑞,曾凡鎖.  植物生理學(xué)報(bào). 2016(05)
[7]西藏光核桃研究進(jìn)展及展望[J]. 張姍姍,鄧嵐,曾秀麗.  農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào). 2016(02)
[8]黑莓果實(shí)UGT78H2重組蛋白誘導(dǎo)的響應(yīng)面優(yōu)化與蛋白純化[J]. 陳清,江雷雨,王燕,朱芳莉,湯浩茹,王小蓉.  植物研究. 2015(05)
[9]日本血吸蟲(chóng)SjRAD23基因的克隆表達(dá)及基因重組抗原的免疫保護(hù)效果[J]. 李長(zhǎng)健,張旻,洪煬,韓艷輝,曹曉丹,韓宏曉,傅志強(qiáng),朱傳剛,陸珂,李浩,林矯矯.  生物工程學(xué)報(bào). 2014(11)
[10]西藏光核桃果實(shí)的品質(zhì)分析[J]. 劉麗,孟凡娟.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(35)

博士論文
[1]擬南芥EAR1通過(guò)增強(qiáng)蛋白磷酸酶2C活性負(fù)調(diào)節(jié)ABA信號(hào)通路[D]. 王凱.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]小麥E3泛素連接酶TaSAP5的功能鑒定及調(diào)控途徑解析[D]. 張寧.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]丹參SmSnRK2s基因和SmAREB1基因的克隆及功能分析[D]. 賈彥彥.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017
[4]楊樹(shù)類ABA受體PtPYRLs抗逆性研究[D]. 蔚靜玲.南京大學(xué) 2016
[5]擬南芥蛋白磷酸酶ABI1的調(diào)控機(jī)理分析[D]. 孔令瑤.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[6]擬南芥Rad23家族基因在脅迫應(yīng)答中的功能分析[D]. 李秀山.湖南大學(xué) 2013
[7]玉米HD-Zip轉(zhuǎn)錄因子家族抗旱相關(guān)基因的鑒定及Zmhdz10功能分析[D]. 趙陽(yáng).安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]干旱脅迫下擬南芥多功能蛋白PCaP2的作用研究[D]. 王宇.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]不同時(shí)期干旱對(duì)苧麻生理生化及產(chǎn)量品質(zhì)的影響[D]. 楊媛.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]蘋(píng)果MdRAD23D1在響應(yīng)干旱及高溫脅迫中的功能研究[D]. 豆芳芳.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018
[4]胡楊和灰楊A(yù)OX1a基因在非生物脅迫響應(yīng)中的功能分化[D]. 雷文麗.蘭州大學(xué) 2018
[5]干旱脅迫對(duì)防風(fēng)幼苗生長(zhǎng)、生理及次生代謝產(chǎn)物的影響[D]. 門(mén)玉倩.內(nèi)蒙古大學(xué) 2018
[6]FER2基因在擬南芥干旱脅迫響應(yīng)中的功能研究[D]. 黃瑩.合肥工業(yè)大學(xué) 2018
[7]干旱脅迫下光核桃葉片響應(yīng)機(jī)制初步研究[D]. 曹原.東北林業(yè)大學(xué) 2017
[8]干旱脅迫下光核桃根系響應(yīng)機(jī)制初步研究[D]. 田艷.東北林業(yè)大學(xué) 2016
[9]光核桃種質(zhì)資源的遺傳多樣性分析[D]. 邢春.東北林業(yè)大學(xué) 2014
[10]喪失頂端優(yōu)勢(shì)的樟子松突變體蛋白質(zhì)組學(xué)研究及Rad23基因克隆[D]. 陸天聰.東北林業(yè)大學(xué) 2010



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