背景和目的:多發(fā)性骨髓瘤（Multiple Myeloma,MM）是一種以骨髓中漿細(xì)胞的惡性增生為主要的病理學(xué)特征的血液系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,疾病過程中最為明顯的臨床病變就是骨骼損害,表現(xiàn)為廣泛性的溶骨性病變與不明原因的病理性骨折。而破骨細(xì)胞作為骨髓微環(huán)境的主角之一,由于骨髓瘤細(xì)胞的大量增殖與骨髓微環(huán)境的相互作用使其被異常激活,從而引發(fā)一系列骨骼損害相關(guān)的癥狀發(fā)生。本研究基于基因芯片技術(shù)篩選出與多發(fā)性骨髓瘤（Multiple Myeloma,MM）病人生存率與預(yù)后相關(guān)的基因,從中選擇一個重要的候選癌基因氨基酰tRNA合成酶相互作用多功能蛋白質(zhì)1（Aminoacy-tRNA synthetase-interacting multi-functional protein 1,AIMP1）作為分析與研究對象;在體外研究AIMP1基因表達(dá)對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖與破骨細(xì)胞分化的關(guān)系的影響;探究AIMP1引起多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖與破骨分化的機制;尋找一種中藥以抑制多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的增殖。方法:1.首先采集了大量初診及大劑量化療后的MM患者骨髓樣本,Affymetrix U133 Plus2.0用作基... 

【文章來源】：南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．髙表達(dá)ＡＩＭＰ１相關(guān)腫瘤的箱形圖

間差異。使用??Ｇｒａｐｈ?Ｐａｄ?Ｐｒｉｓｍ?８．０以及Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ?Ｅｘｃｅｌ?２０１０軟件處理實驗數(shù)據(jù)并作圖。ｐ＜０．?０５表??示存在統(tǒng)計學(xué)意義。??４．結(jié)果??４．丨ＡＩＭＰ１高表達(dá)提示ＭＭ患者預(yù)后不良??使用基因芯片對ＮＰ、ＭＧＵＳ和ＭＭ患者的骨髓漿細(xì)胞進(jìn)行全基因組基因表達(dá)譜篩??選，分析數(shù)據(jù)可得知，在ＭＭ患者的骨髓漿細(xì)胞中，ＡＩＭＰ１表達(dá)量明顯高于ＮＰ和??ＭＧＵＳ，并且ＭＧＵＳ作為已知的ＭＭ的前體疾病，其ＡＩＭＰ１表達(dá)量亦高于ＮＰ（ｐ＜??０．?０００１）（圖２－１Ａ）。同時，處于ＴＴ２的ＭＭ患者，尚表達(dá)ＡＩＭＰ１的ＭＭ患者的總生??存率（ＯＳ）以及無事件生存率（ＥＦＳ）均低于低表達(dá)的患者（ｐ＝０．０００２，ｐ＜０．?０００１）??（圖２－ｌＢ，２＿ｌＣ）。另外，對于接受ＡＰＥＸ的ＭＭ患者，高表達(dá)ＡＩＭＰ１的ＭＭ患者的??總生存率（ＯＳ）低于低表達(dá)的患者（ｐ＜０．０００１）（圖２－１Ｄ）。為了驗證上述結(jié)果的可??靠性，我們使用酶聯(lián)免疫吸附測定實驗（ＥＬＩＳＡ）檢測了?ＮＰ與ＭＭ患者血清中ＡＩＭＰ１??的含量，結(jié)果與預(yù)期一致，ＭＭ患者血清中的ＡＩＭＰ１含量明顯高于正常人（ｐ＝０．?０１９５）??（圖２－１Ｅ）。上述結(jié)果證明，高表達(dá)Ａ１ＭＰ１提示ＭＭ患者預(yù)后不良，提示ＡＩＭＰ１可作??為ＭＭ預(yù)后的潛在標(biāo)志物。??Ａ?ｐ＜０．０００１?Ｂ?ＴＴ２??５０００－１??Ｔ＂?１００－Ｌ．?—?Ｌｏｗ??ｉ：：?＾?ｉ?ｉ??｜?２０００．?ｙｊｐ?§?？??＾?１０００－?２?２０?ｐ＝〇〇〇〇２??ｎ?ＷＭ?ｏＪ￣．￣￣．￣￣．￣￣，——，??０１??＇?＾??０?２０?４０?６

Ｓ的關(guān)系；Ｃ：??不同ＡＩＭＰ１表達(dá)量與ＴＴ２?ＭＭ患者ＥＦＳ的關(guān)系；Ｄ：不同ＡＩＭＰ１表達(dá)量與ＡＰＥＸ?ＭＭ??患者ＯＳ的關(guān)系；Ｅ：ＡＩＭＰ１在正常人與ＭＭ患者血清中的含量（ＮＰ：正�；颊撸唬停停�??ＭＭ患者；）。??４．?２敲低ＡＩＭＰ１可以抑制ＭＭ細(xì)胞增殖??收集Ｈ９２９、ＯＣＩ細(xì)胞空白對照組（Ｃｔｒｌ）與ＡＩＭＰ１?ｓｈＲＮＡ組（ＫＤ）的細(xì)胞沉淀并??提取蛋白，使用Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ檢測以上細(xì)胞株中Ａ１ＭＰ１的蛋白表達(dá)情況以驗證敲低??ＡＩＭＰ１的ＭＭ細(xì)胞株構(gòu)建成功（圖２－２Ａ）。Ａ１ＭＰＩ敲低細(xì)胞構(gòu)建成功后，分別取Ｈ９２９??與０Ｃ丨處于對數(shù)生長期的Ｃｔｒｌ組與ＡＩＭＰ１?ＫＤ組細(xì)胞，使用ＭＴＴ法檢測不同時間段各??組細(xì)胞的０Ｄ值，根據(jù)計算所得相對０Ｄ值來表示細(xì)胞活性（ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）。實驗結(jié)果??證明，在培養(yǎng)４８與７２小時后，Ａ１ＭＰ１敲低組細(xì)胞的細(xì)胞活性均低于對照組（圖２－２Ｂ）??（ｐ＜０．?００１）。由此可證明，Ａ１ＭＰ１敲低后ＭＭ細(xì)胞的增殖受到抑制。??Ａ?Ｂ??Ｈ９２９?ＯＣｉ??８－．??Ｃｔｒｌ?ＫＤ?Ｃｔｒｌ?ＫＤ?＞?ｔｉｌ?＂＂?Ｈ９２９?Ｃｔｒ１??Ｉ?６－?ｊ?ｃａ?Ｈ９２９?ＫＤ??ＡＩＭＰ１?｜?｜?ａ?ＯＣＩ?Ｃｔｒｌ??％?４－?Ｃ３?ＯＣＩ?ＫＤ??「－－二??５?ｌ?Ｗ??ｐ－Ａｃｔｔｎ?孀■■？觸＿■＃?？■■■？?２－?ｌ?Ａ??＇?＿ｎｎｎ?ｉｎ?ｉｆｌ?Ｉｆｉ?丨ｆｉ??２４ｈ?４８ｈ?７２ｈ??ｈｏｕｒｓ??圖２－２．敲低ＡＩＭＰ１可以抑制ＭＭ細(xì)胞增。Ａ：?ＡＩＭＰ１敲低的細(xì)胞中Ａ１ＭＰ１的??

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