目的:喉咽癌是頭頸部常見的惡性腫瘤,預(yù)后極差。基于干細胞移植的基因療法有望改善治療效果。本研究中,我們明確人骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）是否具有潛在喉咽癌歸巢能力,探索桿狀病毒-腺相關(guān)病毒載體（BV-AAV）介導(dǎo)碘化鈉同向轉(zhuǎn)運體（NIS）基因修飾BMSCs靶向喉咽癌放射性¹³¹I治療的應(yīng)用價值。方法:1.構(gòu)建含有Luc-P2A-eGFP或NIS序列,側(cè)翼插入AAV來源的反向末端重復(fù)序列（ITR）的BV-AAV載體（Bac-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR和Bac-CMV-NIS-ITR）。2.從感染效率,細胞毒性,多基因的正確表達這三個方面評價了BV-AAV在BMSCs中的應(yīng)用價值。3.體外通過Transwell遷移試驗;體內(nèi)通過生物發(fā)光成像（BLI）和微單光子發(fā)射計算機斷層掃描成像技術(shù)（micro-SPET/CT）示蹤BMSCs體內(nèi)生物學(xué)分布和腫瘤趨化性。4.利用¹⁸F-FDG micro-PET/CT評估治療后腫瘤糖代謝情況;從腫瘤體積變化和腫瘤組織中細胞增殖標(biāo)志物表達來評估治療后腫瘤增殖情況。結(jié)果:1.MOI=400,Bac-... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

重組pFB-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR質(zhì)粒經(jīng)酶切電泳分析驗證Figure2DNAfragmentselectrophoresisafterpFB-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITRplasmidDNA

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士畢業(yè)論文23圖3重組桿粒BacmidPCR產(chǎn)物凝膠電泳分析驗證Figure2ValidationofbacmidPCRbyDNAgelelectrophoresisM：DNAmarker；1,2：M13F/M13R擴增產(chǎn)物，大小約6.5kb；3,4：M13F/luc2-PacI-F擴增產(chǎn)物，大小約4.3kb；5,6：luc2-PacI-F/luc2-2A-R擴增產(chǎn)物,大小約1.6kb2.4Bac-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR和Bac-CMV-NIS-ITR病毒載體制備重組質(zhì)粒pFB-CMV-Luc-P2A-eGFP-ITR和pFB-CMV-NIS-ITR經(jīng)感受態(tài)菌轉(zhuǎn)化，藍白斑篩選及DNA提取獲得重組桿粒DNA，借助脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染桿狀病毒的宿主細胞sf9，收獲了第一代病毒。通過sf9細胞繼續(xù)擴增得到足夠體積和滴度的重組BV-AAV（圖4）。

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士畢業(yè)論文372結(jié)果2.1BMSCs誘導(dǎo)分化鑒定2.1.1BMSCs成骨誘導(dǎo)分化誘導(dǎo)培養(yǎng)至3周時可見的鈣鹽沉積，茜素紅S染色后，鈣鹽呈紅色，見圖5圖5BMSCs成骨誘導(dǎo)分化（100×）Figure5OsteogenicdifferentiationofBMSCs（100×）在分化第3周，茜素紅染色顯示骨基質(zhì)呈紅色（圖1b）。2.1.2BMSCs成脂誘導(dǎo)分化誘導(dǎo)培養(yǎng)至3周時可見的又大又圓的脂滴，油紅O染色，細胞內(nèi)脂肪滴呈紅色，見圖6。圖6BMSCs成骨誘導(dǎo)分化（100×）Figure6AdipogenicdifferentiationofBMSCs（100×）在分化第3周，油紅O染色清楚地顯示脂肪細胞中紅色脂滴的形成。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Mesenchymal stromal cells’ role in tumor microenvironment:involvement of signaling pathways[J]. Armel Herve Nwabo Kamdje,Paul Takam Kamga,Richard Tagne Simo,Lorella Vecchio,Paul Faustin Seke Etet,Jean Marc Muller,Giulio Bassi,Erique Lukong,Raghuveera Kumar Goel,Jeremie Mbo Amvene,Mauro Krampera.  Cancer Biology & Medicine. 2017(02)
[2]Transgene expression and differentiation of baculovirus-transduced adipose-derived stem cells from dystrophin-utrophin double knock-out mouse[J]. Qiuling Li 1, 2 , Qiongxiang Zhai 2 , Jia Geng 3 , Hui Zheng 4 , Fei Chen 5 , Jie Kong 1 , Cheng Zhang 1 1 Department of Neurology, First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China 2 Department of Pediatrics, Guangdong General Hospital, Guangdong Neuroscience Institute, Guangdong Academy of Medical Sciences, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China 3 Department of Neurology, First Affiliated Hospital, Kunming Medical College, Kunming 650032, Yunnan Province, China 4 Department of Neurology, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China 5 Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510085, Guangdong Province, China.  Neural Regeneration Research. 2012(22)



本文編號：2962270