超氧化物歧化酶（SOD,EC1.15.1.1）是一種關(guān)鍵的酶類抗氧化物質(zhì),筑起了生物體針對(duì)氧毒性的第一道防線,將氧自由基快速歧化為普通分子氧（O₂）和過氧化氫（H₂O₂）。本研究從已構(gòu)建的黃姑魚（Nibea albiflora）轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中篩選出三種SOD基因:胞質(zhì)型銅鋅SOD（IcSOD,MG208871）、胞外型銅鋅SOD（EcSOD,MF974567）和錳SOD（MnSOD,MG208872）,并對(duì)它們的分子特征及功能進(jìn)行了研究,結(jié)果如下:（1）在氨氮和亞硝態(tài)氮急性毒性實(shí)驗(yàn)中,黃姑魚表現(xiàn)出對(duì)氨氮脅迫更為敏感,其氨氮和亞硝態(tài)氮的96小時(shí)半致死濃度(LC₅₀)分別為20.23 mg/L（換算成非離子氨0.57 mg/L）和99.08 mg/L,安全濃度分別為2.02 mg/L（換算成非離子氨0.06 mg/L）和9.91 mg/L。（2）黃姑魚IcSOD（NaIcSOD）cDNA全長793 bp,包括58 bp的5?非編碼區(qū)（UTR）、270 bp的3?非編碼區(qū)（UTR）和465 bp的開放閱讀... 

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 黃姑魚簡介
    1.2 水環(huán)境中的無機(jī)氮及其對(duì)魚類的影響
        1.2.1 氨氮
        1.2.2 亞硝態(tài)氮
        1.2.3 硝態(tài)氮
    1.3 氧自由基與抗氧化系統(tǒng)
        1.3.1 氧自由基
        1.3.2 抗氧化系統(tǒng)
    1.4 SOD的研究進(jìn)展及應(yīng)用
        1.4.1 SOD的研究進(jìn)展
        1.4.2 SOD在水生動(dòng)物中的研究進(jìn)展
        1.4.3 SOD的應(yīng)用
    1.5 研究目的及意義
第2章 黃姑魚IcSOD基因的表達(dá)和功能研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 菌株和載體
        2.1.4 引物
        2.1.5 儀器設(shè)備
        2.1.6 培養(yǎng)基配置
        2.1.7 常用試劑配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 氨氮和亞硝態(tài)氮毒性實(shí)驗(yàn)
        2.2.2 黃姑魚健康組織取樣
        2.2.3 總RNA的提取
        2.2.4 cDNA第一條鏈的合成及檢測(cè)
        2.2.5 NaIcSODcDNA序列篩選及同源片段驗(yàn)證
        2.2.6 生物信息學(xué)分析
        2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）
        2.2.8 NaIcSOD的原核表達(dá)及蛋白純化
        2.2.9 GSTpull-down
        2.2.10 純化蛋白的SOD酶活測(cè)定及其溫度/pH穩(wěn)定性測(cè)試
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 氨氮和亞硝態(tài)氮對(duì)黃姑魚的急性毒性實(shí)驗(yàn)
        2.3.2 RNA提取及cDNA質(zhì)量檢測(cè)
        2.3.3 NaIcSOD基因的生物信息學(xué)分析
        2.3.4 NaIcSODmRNA組織分布和急性毒性實(shí)驗(yàn)后的表達(dá)變化
        2.3.5 NaIcSOD重組表達(dá)與純化
        2.3.6 GST下拉尋找與黃姑魚IcSOD相互作用的蛋白
        2.3.7 NaIcSOD的溫度/pH穩(wěn)定性測(cè)試
    2.4 討論
第3章 黃姑魚EcSOD基因的表達(dá)和功能研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 菌株和載體
        3.1.4 引物
        3.1.5 儀器設(shè)備
        3.1.6 培養(yǎng)基配置
        3.1.7 常用試劑配置
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 氨氮和亞硝態(tài)氮毒性實(shí)驗(yàn)
        3.2.2 黃姑魚健康組織取樣
        3.2.3 總RNA的提取
        3.2.4 cDNA第一條鏈的合成及檢測(cè)
        3.2.5 NaEcSODcDNA序列篩選及同源片段驗(yàn)證
        3.2.6 生物信息學(xué)分析
        3.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）
        3.2.8 NaEcSOD的原核表達(dá)及蛋白純化
        3.2.9 GSTpull-down及蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析
        3.2.10 純化蛋白的SOD酶活測(cè)定及其溫度/pH穩(wěn)定性測(cè)試
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 RNA提取及cDNA質(zhì)量檢測(cè)
        3.3.2 NaEcSOD基因的生物信息學(xué)分析
        3.3.3 NaEcSODmRNA組織分布及急性毒性實(shí)驗(yàn)后的表達(dá)變化
        3.3.4 NaEcSOD重組表達(dá)與純化
        3.3.5 GST下拉尋找與黃姑魚EcSOD相互作用的蛋白及其質(zhì)譜分析
        3.3.6 NaEcSOD的溫度/pH穩(wěn)定性測(cè)試
    3.4 討論
第4章 黃姑魚MnSOD基因的表達(dá)和功能研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 菌株和載體
        4.1.4 引物
        4.1.5 儀器設(shè)備
        4.1.6 培養(yǎng)基配置
        4.1.7 常用試劑配置
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 氨氮和亞硝態(tài)氮毒性實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 黃姑魚健康組織取樣
        4.2.3 總RNA的提取
        4.2.4 cDNA第一條鏈的合成及檢測(cè)
        4.2.5 NaMnSODcDNA序列篩選及同源片段驗(yàn)證
        4.2.6 生物信息學(xué)分析
        4.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）
        4.2.8 NaMnSOD的原核表達(dá)
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 RNA提取及cDNA質(zhì)量檢測(cè)
        4.3.2 NaMnSOD基因的生物信息學(xué)分析
        4.3.3 NaMnSODmRNA組織分布及急性毒性實(shí)驗(yàn)后的表達(dá)變化
        4.3.4 NaMnSOD重組表達(dá)
    4.4 討論
第5章 總結(jié)
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]文蛤胞內(nèi)銅鋅超氧化物歧化酶的基因克隆與表達(dá)及重組蛋白活性的測(cè)定[D]. 朱丹.遼寧師范大學(xué) 2011
[2]氨氮和亞硝態(tài)氮脅迫對(duì)日本沼蝦血淋巴的影響[D]. 王國江.河北大學(xué) 2008



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