發(fā)布時間：2021-01-05 13:29

　　超氧化物歧化酶（SOD,EC1.15.1.1）是一種關(guān)鍵的酶類抗氧化物質(zhì),筑起了生物體針對氧毒性的第一道防線,將氧自由基快速歧化為普通分子氧（O₂）和過氧化氫（H₂O₂）。本研究從已構(gòu)建的黃姑魚（Nibea albiflora）轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中篩選出三種SOD基因:胞質(zhì)型銅鋅SOD（IcSOD,MG208871）、胞外型銅鋅SOD（EcSOD,MF974567）和錳SOD（MnSOD,MG208872）,并對它們的分子特征及功能進行了研究,結(jié)果如下:（1）在氨氮和亞硝態(tài)氮急性毒性實驗中,黃姑魚表現(xiàn)出對氨氮脅迫更為敏感,其氨氮和亞硝態(tài)氮的96小時半致死濃度(LC₅₀)分別為20.23 mg/L（換算成非離子氨0.57 mg/L）和99.08 mg/L,安全濃度分別為2.02 mg/L（換算成非離子氨0.06 mg/L）和9.91 mg/L。（2）黃姑魚IcSOD（NaIcSOD）cDNA全長793 bp,包括58 bp的5?非編碼區(qū)（UTR）、270 bp的3?非編碼區(qū)（UTR）和465 bp的開放閱讀... 

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 黃姑魚簡介
    1.2 水環(huán)境中的無機氮及其對魚類的影響
        1.2.1 氨氮
        1.2.2 亞硝態(tài)氮
        1.2.3 硝態(tài)氮
    1.3 氧自由基與抗氧化系統(tǒng)
        1.3.1 氧自由基
        1.3.2 抗氧化系統(tǒng)
    1.4 SOD的研究進展及應(yīng)用
        1.4.1 SOD的研究進展
        1.4.2 SOD在水生動物中的研究進展
        1.4.3 SOD的應(yīng)用
    1.5 研究目的及意義
第2章 黃姑魚IcSOD基因的表達和功能研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 菌株和載體
        2.1.4 引物
        2.1.5 儀器設(shè)備
        2.1.6 培養(yǎng)基配置
        2.1.7 常用試劑配置
    2.2 實驗方法
        2.2.1 氨氮和亞硝態(tài)氮毒性實驗
        2.2.2 黃姑魚健康組織取樣
        2.2.3 總RNA的提取
        2.2.4 cDNA第一條鏈的合成及檢測
        2.2.5 NaIcSODcDNA序列篩選及同源片段驗證
        2.2.6 生物信息學(xué)分析
        2.2.7 實時熒光定量PCR（qRT-PCR）
        2.2.8 NaIcSOD的原核表達及蛋白純化
        2.2.9 GSTpull-down
        2.2.10 純化蛋白的SOD酶活測定及其溫度/pH穩(wěn)定性測試
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 氨氮和亞硝態(tài)氮對黃姑魚的急性毒性實驗
        2.3.2 RNA提取及cDNA質(zhì)量檢測
        2.3.3 NaIcSOD基因的生物信息學(xué)分析
        2.3.4 NaIcSODmRNA組織分布和急性毒性實驗后的表達變化
        2.3.5 NaIcSOD重組表達與純化
        2.3.6 GST下拉尋找與黃姑魚IcSOD相互作用的蛋白
        2.3.7 NaIcSOD的溫度/pH穩(wěn)定性測試
    2.4 討論
第3章 黃姑魚EcSOD基因的表達和功能研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 菌株和載體
        3.1.4 引物
        3.1.5 儀器設(shè)備
        3.1.6 培養(yǎng)基配置
        3.1.7 常用試劑配置
    3.2 實驗方法
        3.2.1 氨氮和亞硝態(tài)氮毒性實驗
        3.2.2 黃姑魚健康組織取樣
        3.2.3 總RNA的提取
        3.2.4 cDNA第一條鏈的合成及檢測
        3.2.5 NaEcSODcDNA序列篩選及同源片段驗證
        3.2.6 生物信息學(xué)分析
        3.2.7 實時熒光定量PCR（qRT-PCR）
        3.2.8 NaEcSOD的原核表達及蛋白純化
        3.2.9 GSTpull-down及蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析
        3.2.10 純化蛋白的SOD酶活測定及其溫度/pH穩(wěn)定性測試
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 RNA提取及cDNA質(zhì)量檢測
        3.3.2 NaEcSOD基因的生物信息學(xué)分析
        3.3.3 NaEcSODmRNA組織分布及急性毒性實驗后的表達變化
        3.3.4 NaEcSOD重組表達與純化
        3.3.5 GST下拉尋找與黃姑魚EcSOD相互作用的蛋白及其質(zhì)譜分析
        3.3.6 NaEcSOD的溫度/pH穩(wěn)定性測試
    3.4 討論
第4章 黃姑魚MnSOD基因的表達和功能研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 菌株和載體
        4.1.4 引物
        4.1.5 儀器設(shè)備
        4.1.6 培養(yǎng)基配置
        4.1.7 常用試劑配置
    4.2 實驗方法
        4.2.1 氨氮和亞硝態(tài)氮毒性實驗
        4.2.2 黃姑魚健康組織取樣
        4.2.3 總RNA的提取
        4.2.4 cDNA第一條鏈的合成及檢測
        4.2.5 NaMnSODcDNA序列篩選及同源片段驗證
        4.2.6 生物信息學(xué)分析
        4.2.7 實時熒光定量PCR（qRT-PCR）
        4.2.8 NaMnSOD的原核表達
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 RNA提取及cDNA質(zhì)量檢測
        4.3.2 NaMnSOD基因的生物信息學(xué)分析
        4.3.3 NaMnSODmRNA組織分布及急性毒性實驗后的表達變化
        4.3.4 NaMnSOD重組表達
    4.4 討論
第5章 總結(jié)
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點
    5.3 展望
致謝
參考文獻
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]急性氨氮脅迫對圓斑星鰈（Verasper variegatus）幼魚鰓和肝組織結(jié)構(gòu)及相關(guān)酶活性的影響[J]. 王貞杰,陳四清,曹棟正,盧斌,常青,劉長琳,燕敬平.  漁業(yè)科學(xué)進展. 2017(02)
[2]超氧化物歧化酶的研究進展[J]. 袁牧,王昌留,王一斐,徐貴華,韓瀟.  中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志. 2016(06)
[3]黃姑魚染色體識別與重復(fù)序列定位[J]. 鄭嬌,曹款,楊安冉,張靜,王志勇,蔡明夷.  水產(chǎn)學(xué)報. 2016(08)
[4]常見水質(zhì)指標(biāo)對患腹水病黃顙魚組織病理的影響[J]. 張濤,宋文華,富麗靜,胡宗云,李赫,閆有利.  水產(chǎn)學(xué)雜志. 2015(03)
[5]亞硝態(tài)氮對草魚離體肝細胞抗氧化體系的影響[J]. 尹曉燕,田興,李大鵬,湯蓉.  淡水漁業(yè). 2014(05)
[6]急性氨氮脅迫對脊尾白蝦（Exopalaemon carinicauda）抗氧化系統(tǒng)酶活力及GPx基因表達的影響[J]. 任海,李健,李吉濤,梁忠秀,梁俊平,葛倩倩,劉萍.  農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報. 2014(04)
[7]亞硝酸氮對紅鰭東方鲀的毒性效應(yīng)[J]. 汪家鑫,張釗,胡盼,姜志強,王鑫,楊晶晶,王雙耀.  廣東海洋大學(xué)學(xué)報. 2013(06)
[8]氨氮對草魚幼魚的急性毒性試驗[J]. 梁健,王紅權(quán),金柏濤,唐德約,陳云飛,趙玉蓉.  科學(xué)養(yǎng)魚. 2013(11)
[9]線粒體動力學(xué)與心肌細胞能量代謝的研究進展[J]. 阿力木江·買買提江,高秀芳,金波,施海明.  復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2013(05)
[10]氨氮對青魚幼魚的急性毒性研究[J]. 李昭林,黃云,田芊芊,劉莊鵬,張俊智,胡毅.  科學(xué)養(yǎng)魚. 2013(05)

博士論文
[1]海灣扇貝超氧化物歧化酶家族基因結(jié)構(gòu)、表達和多態(tài)性分析[D]. 包永波.中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2009

碩士論文
[1]文蛤胞內(nèi)銅鋅超氧化物歧化酶的基因克隆與表達及重組蛋白活性的測定[D]. 朱丹.遼寧師范大學(xué) 2011
[2]氨氮和亞硝態(tài)氮脅迫對日本沼蝦血淋巴的影響[D]. 王國江.河北大學(xué) 2008



本文編號：2958751