本文關(guān)鍵詞：沉默ACTN1基因表達(dá)能抑制腎癌細(xì)胞的生長且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討ACTN1基因(α-actin 1)表達(dá)與腎細(xì)胞癌發(fā)病的相關(guān)性。在其它類型腫瘤(結(jié)腸癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌等)中已經(jīng)證實(shí)ACTN基因在癌組織中是高表達(dá)的,但是ACTN1基因與腎癌的關(guān)系尚不清楚。若能證明ACTN1基因在腎細(xì)胞癌中同樣高表達(dá),在體外功能實(shí)驗(yàn)中觀察沉默ACTN1基因的表達(dá)之后,否能影響腎癌細(xì)胞的生長及凋亡。方法收集38例腎癌患者的腎癌組織及相對應(yīng)的癌旁組織通過實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)和免疫印跡(western-blotting,WB)的方法來觀察ACTN1基因在癌組織中的表達(dá)情況。設(shè)計(jì)針對ACTN1基因的siRNA來沉默該基因在腎癌細(xì)胞系786-O和A704中的表達(dá),通過與空白對照組和陰性對照組之間的對比觀察ACTN1基因?qū)δI癌細(xì)胞系的生長、增殖、侵襲、遷徙、凋亡、以及細(xì)胞周期等方面的影響。通過測序的方法探索影響腎癌組織中ACTN1基因高表達(dá)的影響因素。結(jié)果1.在38例腎癌患者的腎癌組織中ACTN1的表達(dá)比相對應(yīng)的癌旁組織要高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.siRNA能有效地、特異地下調(diào)腎癌細(xì)胞系786-O和A704中ACTN1基因mRNA(P0.01)和蛋白的表達(dá)。3.ACTN1基因表達(dá)的下調(diào)會抑制腎癌細(xì)胞系786-O和A704增殖、侵襲、遷移。4.ACTN1基因表達(dá)的下調(diào)會誘導(dǎo)腎癌細(xì)胞系786-O和A704的凋亡。5.ACTN1基因表達(dá)的下調(diào)會影響腎癌細(xì)胞系786-O和A704細(xì)胞周期,使細(xì)胞周期停滯在G0/G1期。6.腎癌中ACTN1基因的高表達(dá)可能與基因拷貝數(shù)變異(copy number alterations,CNAs)有關(guān)。結(jié)論1.ACTN1基因在腎細(xì)胞癌中的高表達(dá)提示該基因在腎細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的過程中起到重要的作用,是腎癌形成的相關(guān)癌基因之一;2.下調(diào)ACTN1基因的表達(dá)可抑制腎癌細(xì)胞系的增殖、侵襲、遷移,說明ACTN1基因可能在腎細(xì)胞癌中對腫瘤的生長、向周圍組織侵犯、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的方面起著至關(guān)重要的作用。3.下調(diào)ACTN1基因的表達(dá)會有到腎癌細(xì)胞系發(fā)生凋亡,且起到阻滯細(xì)胞周期的作用。
【關(guān)鍵詞】：腎細(xì)胞癌 ACTN1基因 小干擾RNA
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-7
• 一 前言7-10
• 1.1 腎細(xì)胞癌7
• 1.2 腎細(xì)胞癌基因?qū)W及靶向治療的研究現(xiàn)狀7-8
• 1.3 ACTN1與腫瘤的關(guān)系8-9
• 1.4 本研究設(shè)計(jì)思路9-10
• 二 材料與方法10-19
• 2.1 腎癌組織樣本的收集10
• 2.2 主要試劑和儀器10-12
• 2.3 細(xì)胞培養(yǎng)12
• 2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染12
• 2.5 實(shí)時(shí)定量PCR12-14
• 2.5.1 RNA組織的提取13
• 2.5.2 去基因組13-14
• 2.5.3 純度檢測14
• 2.5.4 逆轉(zhuǎn)錄14
• 2.5.5 PCR定量14
• 2.6 Western blot檢測14-16
• 2.6.1 SDS-PAGE電泳分離膠的配制14-15
• 2.6.2 SDS-PAGE電泳濃縮膠的配制15
• 2.6.3 樣品的處理15
• 2.6.4 免疫印跡（Western Blotting）15-16
• 2.7 cck-8 試驗(yàn)測試細(xì)胞增殖能力16
• 2.8 transwell法檢測細(xì)胞遷移能力16
• 2.9 transwell法檢測細(xì)胞侵襲能力16-17
• 2.10 細(xì)胞劃痕試驗(yàn)17
• 2.11 細(xì)胞凋亡檢測17-18
• 2.12 細(xì)胞周期分析18
• 2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法18
• 2.14 測序方法探索ACTN1基因在RCC中高表達(dá)的影響因素18-19
• 三 結(jié)果19-26
• 3.1 ACTN1 mRNA水平在RCC患者的腫瘤組織中高于癌旁正常組織19-20
• 3.2 ACTN1 siRNA有效下調(diào)腎癌細(xì)胞系中ACTN1 mRNA和蛋白的表達(dá)20-21
• 3.3 ACTN1 siRNA抑制腎癌細(xì)胞的增殖21-22
• 3.4 Transwell法證實(shí)ACTN1 siRNA抑制腎癌細(xì)胞的侵襲和遷移22-23
• 3.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)ACTN1 siRNA使腎癌細(xì)胞的侵襲力下降23-24
• 3.6 ACTN1 siRNA誘導(dǎo)腎癌細(xì)胞系凋亡24
• 3.7 下調(diào)ACTN1基因阻斷腎癌細(xì)胞系細(xì)胞周期進(jìn)程24-25
• 3.8 RCC腫瘤組織ACTN1過表達(dá)可能受基因拷貝數(shù)變異影響25-26
• 四 討論26-27
• 五 結(jié)論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-31
• 縮略詞表31-32
• 綜述：單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序在腫瘤異質(zhì)性研究及臨床中的應(yīng)用32-43
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 在學(xué)期間研究成果43-44
• 致謝44

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