一、研究背景先天性巨結(jié)腸（Hirschsprung disease HSCR）為小兒常見的腸道動力性疾病,總體發(fā)病率為1/5000[1],為胚胎期腸神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常所致,多基因作用下如在發(fā)育中某個或者多個環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常則導致結(jié)腸神經(jīng)化失敗,表現(xiàn)為腸段肌間及粘膜下無神經(jīng)節(jié),故HSCR又稱為腸無神經(jīng)節(jié)疾病[2.3]�；純和ǔＴ诔錾蠹闯霈F(xiàn)遠端腸梗阻的癥狀,如不及時治療,將危及生命。目前除全腸型巨結(jié)腸無有效治療方法外,其他類型巨結(jié)腸皆以手術(shù)切除病變腸段為主,但許多患者術(shù)后仍出現(xiàn)大便失禁,便秘和小腸結(jié)腸炎等長期并發(fā)癥[4.5]。可見HSCR患兒術(shù)后的痊愈情況仍需擔憂,所以深入研究腸道神經(jīng)節(jié)缺失的發(fā)育學基礎(chǔ),發(fā)展新的治療手段,具有十分重要的意義。HSCR為胚胎期腸神經(jīng)嵴細胞（Enteric neural crest cell,ENCSC）增殖、遷移、分化異常致結(jié)腸神經(jīng)化失敗。研究發(fā)現(xiàn),在胚胎發(fā)育過程中,ENCSC最早于孕5周出現(xiàn)在發(fā)育中的食管,然后由頭端開始向尾腸遷移,沿著發(fā)育中的腸道遷移,同時伴隨著增殖,神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞分化,于孕12周時到達遠端結(jié)腸,最后神經(jīng)化結(jié)腸形成功能性神經(jīng)節(jié)[6]。動... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１本課題研宄病人血液細胞的ＤＳＣＡＭ基因外顯子測序

??Ｈ??圖１－２經(jīng)培養(yǎng)得到的原代細胞??ＤＳＣＡＭ＿／－－ＤＦｓ（Ａ）和?Ｃｏｎ－ＤＦｓ（Ｂ）?（ｂａｒ＝２００?ｐｍ）?（ＤＦｓ：成纖維細胞）??３．３逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝??將三種質(zhì)粒（ｐＵＭＶＣ、ｐＨＳＣＲ－Ｖ－ＶＳＶ－Ｇ?和?ｐＭＸ－ＧＦＰ）共轉(zhuǎn)染?２９３ＦＴ?細胞，??可制備用于感染人成纖維細胞的逆轉(zhuǎn)錄病毒。ＧＦＰ基因表達之后使細胞呈現(xiàn)綠??色熒光。同時，ｐＨＳＣＲ－Ｖ－ＶＳＶ－Ｇ質(zhì)粒的表達促使細胞融合的發(fā)生。在一定程度??上，融合程度與病毒毒力正相關(guān)（圖１－３）。??４．；?“??圖１－３經(jīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染ＰＭＸ－ｈｒＧＦＰ４８小時后的２９３ＦＴ細胞形態(tài)及熒光表達（ｂａｒ＝１００??｜ｊ．ｍ）??３．４?ＨＳＣＤＦｓ（Ｃ）、Ｃｏｎ－ＤＦｓ?重編程為?ＤＳＣＡＭ－／ＭＰＳＣｓ、Ｃｏｎ－ｈｉＰＳＣｓ?細胞??將包裝了?〇ｃｔ４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ和Ｋｌｆ４四個轉(zhuǎn)錄因子的逆轉(zhuǎn)錄病毒共感染??ＤＳＣＡＭｖＭＰＳＣｓ、Ｃｏｎ－ｉＰＳＣｓ?（圖?１－４Ａ）和（１－４Ａ１），在約第?３?天觀察，可見細??３１??

可制備用于感染人成纖維細胞的逆轉(zhuǎn)錄病毒。ＧＦＰ基因表達之后使細胞呈現(xiàn)綠??色熒光。同時，ｐＨＳＣＲ－Ｖ－ＶＳＶ－Ｇ質(zhì)粒的表達促使細胞融合的發(fā)生。在一定程度??上，融合程度與病毒毒力正相關(guān)（圖１－３）。??４．；?“??圖１－３經(jīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染ＰＭＸ－ｈｒＧＦＰ４８小時后的２９３ＦＴ細胞形態(tài)及熒光表達（ｂａｒ＝１００??｜ｊ．ｍ）??３．４?ＨＳＣＤＦｓ（Ｃ）、Ｃｏｎ－ＤＦｓ?重編程為?ＤＳＣＡＭ－／ＭＰＳＣｓ、Ｃｏｎ－ｈｉＰＳＣｓ?細胞??將包裝了?〇ｃｔ４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ和Ｋｌｆ４四個轉(zhuǎn)錄因子的逆轉(zhuǎn)錄病毒共感染??ＤＳＣＡＭｖＭＰＳＣｓ、Ｃｏｎ－ｉＰＳＣｓ?（圖?１－４Ａ）和（１－４Ａ１），在約第?３?天觀察，可見細??３１??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Genetic interactions and modifi er genes in Hirschsprung’s disease[J]. Adam S Wallace,Richard B Anderson.  World Journal of Gastroenterology. 2011(45)



本文編號：2928862