家蠶（Bombyx mori）是一種重要的經(jīng)濟昆蟲,其生長速度快、繭層率高,具有高效的蛋白質(zhì)合成能力。Transfer RNAs（tRNA）是蛋白質(zhì)翻譯過程中的適配器,其在蛋白翻譯過程中發(fā)揮著重要的樞紐作用。眾多研究顯示,大部分生物會將其所編碼基因的1%-10%用在tRNA的轉(zhuǎn)錄后修飾上,以實現(xiàn)對其活性的調(diào)控。如果密碼子的第一個堿基為A或U,在許多生物對應(yīng)的tRNA的37位腺嘌呤堿基上經(jīng)常會進行異戊烯基化修飾,即N6-isopentenyladenosine（i6A37）。已有研究顯示tRNA的37位腺嘌呤異戊烯基修飾會顯著影響蛋白質(zhì)翻譯的精確性及效率,其是通過異戊烯基轉(zhuǎn)移酶（tRNA-isopentenyltransferase,IPT）實現(xiàn)的。在不同物種中,已證實異戊烯基轉(zhuǎn)移酶基因突變會對氨基酸加載以及對生物體生長發(fā)育的產(chǎn)生不同程度的影響。本課題著重于探索tRNA的37位腺嘌呤堿基異戊烯基化修飾對蠶體、特別是絲腺蛋白質(zhì)合成的影響。本文擬首先在家蠶中鑒定異戊烯基轉(zhuǎn)移酶基因,通過對缺陷型酵母功能互補實驗驗證其功能,然后基于RNAi、轉(zhuǎn)基因過量表達等手段研究該基因下調(diào)及上調(diào)表達對家蠶吐絲... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

延伸過程

圖 1.3 tRNA 修飾的重要性[23]Fig 1.3 Pivotal roles of nucleoside modification for tRNA function顯著影響翻譯的效率和準確性的重要因素之一。細胞中 tRN率的影響是翻譯研究的一個重要課題[24]。修飾是由常見的 20 種氨基酸組成，但是 tRNA 分子僅由四種核糖行使其功能多樣性，就要依靠大量的轉(zhuǎn)錄后修飾[25]。例如，須進行折疊，5'和 3'加工以除去前導(dǎo)序列，3’端添加有 CCA ，同時在整個過程中發(fā)生多個復(fù)雜的化學(xué)修飾，才會形另外，還需要對 tRNA 各個位點進行修飾，從而使其發(fā)揮正NA的修飾主要有5-羥基尿苷（Xo5U）、5-羧甲基氨甲基尿苷（C甲基尿苷（mCm5U）、5-甲基-2硫代尿苷（Xm5s2U）、2-賴氨酸胞基尿苷（Com5U）、次黃嘌呤（I）、7-甲基尿苷（m7G）、5-甲基胞苷m6A）、2-硫代胞苷（s2C）、假尿苷（ψ）、N6-蘇氨酸羰酸腺苷

NA 的異戊烯基化修飾細菌和真核生物體中，當 mRNA 中的第一位密碼子是腺苷或尿苷時，所NA 在與反密碼子相鄰的 3'-腺苷（A37）處是一個超修飾核苷酸，其中修飾是最常見的一種修飾。戊烯基化修飾這種龐大而疏水的高等修飾被認為涉及穩(wěn)定譯碼過程中反密碼子之間內(nèi)在弱的 A-U 堿基配對相互作用，這基于兩個基本原理假異戊烯基化基團可能使反密碼子環(huán)的閉合構(gòu)象不穩(wěn)定，并賦予經(jīng)典的 象的熱力學(xué)穩(wěn)定性，導(dǎo)致在解碼之前暴露反密碼子環(huán)[47, 48]，如圖 1.4 所A 處于非修飾狀態(tài)時，37 位上的腺嘌呤核苷酸會與 33 位上的尿嘧啶核苷對，從而使其反密碼子環(huán)被隱藏起來，當 tRNA 與 DMAPP 相互作用時腺嘌呤核苷酸會被暴露出來，當 37 位上的腺嘌呤核苷酸被異戊烯基化其反密碼子環(huán)被徹底暴露出來，從而使得 tRNA 可以參與之后的翻譯過程 1.4 所示）。tRNA 異戊烯基化修飾的具體方程式如圖 1.5 所示。其次，這飾可能改善核糖體A位密碼子-反密碼子微螺旋的鏈間堿基堆積相互作

【參考文獻】：
期刊論文
[1]蛋白質(zhì)翻譯過程中的忠實性機制[J]. 謝兆輝.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2011(09)
[2]tRNA的結(jié)構(gòu)、功能及合成簡介[J]. 俎魯霞,徐國恒.  生物學(xué)通報. 2008(01)
[3]在分子基礎(chǔ)上展示真核轉(zhuǎn)錄過程——2006年諾貝爾化學(xué)獎獲得者羅杰·科恩伯格[J]. 郭丹,馬宏佳,李甜.  生命的化學(xué). 2007(01)
[4]真核生物轉(zhuǎn)錄的發(fā)現(xiàn)[J]. 郭曉強.  生命的化學(xué). 2004(06)
[5]影響家蠶脂肪體增長的若干因素[J]. 沈衛(wèi)德,胡雨亭.  中國蠶業(yè). 1999(04)

碩士論文
[1]tRNA資源優(yōu)化配置對釀酒酵母翻譯速率的影響研究[D]. Siddiq ur Rahman.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015



本文編號：2926324