(+)-新薄荷醇脫氫酶是一種單萜脫氫酶,參與單萜物質(zhì)（+）-新薄荷醇和（+）-異薄荷醇的合成。利用RACE技術(shù),從桂花花瓣中克隆獲得1個(gè)桂花MNR基因的cDNA全長(zhǎng),命名為OfMNR。OfMNR基因序列長(zhǎng)度為1 092 bp,包含936 bp的開放閱讀框,編碼312個(gè)氨基酸。序列分析表明:OfMNR編碼的氨基酸序列與其他植物中預(yù)測(cè)的MNR具有較高的相似性。采用qPCR技術(shù)檢測(cè)了OfMNR在桂花2個(gè)品種的不同組織和不同花期中的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)OfMNR在2個(gè)品種中花瓣的表達(dá)量均最高,并且在4個(gè)花期中呈現(xiàn)不同的變化趨勢(shì)。 

【文章來源】：分子植物育種. 2016年06期 北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

OfMNR基因的全長(zhǎng)序列及其編碼的氨基酸序列Figure1Full-lengthsequenceandcodingaminoacidofOfMNRgene

根和葉片中次之，而在莖中表達(dá)量最低。OfMNR基因在波葉金桂和日香桂的4個(gè)花期香眼期、初花期、盛花期和末花期同樣均有表達(dá)，但兩個(gè)品種的結(jié)果具有差異性，波葉金桂在香眼期有小幅下降，隨后逐步升高，在末花期到達(dá)峰值。日香桂從香眼期表達(dá)量逐步升高，到盛花期達(dá)到峰值，隨后在末花期降低(圖6)。2討論MNR基因在植物單萜類的代謝過程中有重要圖2OfMNR基因的中間片段(A),3'RACE(B),5'RACE(C)和ORF擴(kuò)增(D)注:M:DL2501Figure2Fragment(A),RACE(B)andORF(C)amplicationofOfMNR(D)Note:M:DL2501圖3OfMNR蛋白質(zhì)序列的特征性結(jié)構(gòu)域Figure3CharacteristicdomainofOfMNR圖4蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Figure4Proteinsecondarystructureprediction1391

分子植物育種MolecularPlantBreeding3材料與方法3.1試材植物材料包括2個(gè)桂花品種，分別是波葉金桂Osmanthusfragrans'BoyeJingui'和日香桂Osmanthusfragrans'RixiangGui'2個(gè)品種，均來自南京林業(yè)大學(xué)校園內(nèi)，樹齡分別為30a和15a，栽培管理?xiàng)l件一致。(1)花瓣的采集：東、南、西、北4個(gè)方位均進(jìn)行采花，采集香眼期、初花期、盛花期、末花期四個(gè)發(fā)育時(shí)期的花瓣；(2)莖段的采集：取當(dāng)年生枝條，用枝剪將其分段；(3)葉片的采集：取當(dāng)年生葉片，用剪刀將葉片中脈去掉；(4)根的采集：將當(dāng)年生枝條作為母本進(jìn)行扦插，獲得扦插苗，取其根系。以上植物材料在采集后迅速裝于離心管內(nèi)，液氮速凍后，-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆?母洪娜等,2015)。3.2基因克隆按照植物總RNA提取試劑盒(Tiangen)，對(duì)桂花花瓣RNA進(jìn)行提取，用NanoDrop2000檢測(cè)提取的RNA濃度和OD值，并用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性。使用RevertAidTM第一鏈cDNASynthesis試劑盒(ThermoScientific)合成第一鏈cDNA。PCR反應(yīng)體系為：cDNA模板50ng，10×PCRBuffer(Mg2+free)5.0μL，MgCl2(25mmol/L)5μL，dNTPMixture(2.5mmol/Leach)8μL，正反引物(10mmol/L)各2.0μL，TaKaRaLATaq(5U/μL)0.5μL，加ddH2O至總體系50.0μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃3min；94℃30s，58℃30s，72℃2min，30個(gè)循環(huán)；72℃10min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過電泳檢測(cè)后，使用膠回收試劑盒(TransGenBiotech)從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段，使用pEASY-T1CloningKit進(jìn)行TA克隆，將陽性克隆鑒定后送公司測(cè)序。根據(jù)測(cè)序結(jié)果設(shè)計(jì)RACE引物，對(duì)目的基因進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增3'端和5'端，具體按照3'-FullRACECoreSetwithPrimeScriptTMRTase和5'-FullRACE

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]中國(guó)部分桂花品種芳香成分研究[D]. 孫寶軍.河南大學(xué) 2011



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