三七（Panax notoginseng（Burk）F.H.Chen）是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材,主要產(chǎn)于云南省文山地區(qū)。三七獨(dú)特的生長(zhǎng)環(huán)境極容易誘發(fā)病蟲害,尤其是真菌病害,其中主要由茄腐鐮刀菌（Fusarium solani）引起的根腐病是三七的主要病害,嚴(yán)重影響了三七原藥材的產(chǎn)量和品質(zhì)。三七的抗病遺傳育種研究鮮見報(bào)道,因而迫切需要加強(qiáng)三七與根腐病等病害的分子互作機(jī)制研究,發(fā)掘和克隆響應(yīng)病原菌入侵的防衛(wèi)相關(guān)基因,為三七的抗病育種提供理論基礎(chǔ)。Dirigent（DIR）基因編碼的蛋白能催化木質(zhì)素單體耦合,參與木質(zhì)素和木脂素合成過(guò)程,是植物防衛(wèi)反應(yīng)的重要組成部分。本研究基于三七受茄腐鐮刀菌侵染后的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序獲得的DIR表達(dá)序列標(biāo)簽（expressed sequence tag,EST）,通過(guò)cDNA末端快速擴(kuò)增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技術(shù)從三七中克隆得到7個(gè)DIR基因全長(zhǎng)cDNA序列,并利用生物信息學(xué)分析這7個(gè)基因及其編碼蛋白質(zhì)的特征。通過(guò)實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（Quantitative real-time reverse transcri... 

【文章來(lái)源】：昆明理工大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

火炬松細(xì)胞內(nèi)松柏醇的合成途徑Figure1.1BiosynthesispathwayofconiferylalcoholinthecellsofPinustaeda

七DIR基因全長(zhǎng)cDNA序列。BLASTN分析表明7個(gè)全長(zhǎng)cDNA序列編碼蛋白都含有DIR蛋白保守結(jié)構(gòu)域，遂將7個(gè)DIR基因分別命名為PnDIR1~PnDIR7。7個(gè)基因的RACE擴(kuò)增結(jié)果如圖2.1和圖2.2。圖 2. 1 三七 PnDIRs 基因的 5′ RACE 擴(kuò)增產(chǎn)物M：DL2000 DNA Marker；1、2、3、4：分別是PnDIR1、PnDIR5、PnDIR6、PnDIR7的5′ RACE基因擴(kuò)增產(chǎn)物Fig. 2.1 The amplification results of 5′ RACE of PnDIRs from P. notoginsengM：DL2000 DNA Marker；1, 2, 3 and 4 are the amplification results of 5′RACE of PnDIR1,PnDIR5, PnDIR6 and PnDIR7

28圖 2. 3 三七 DIRs 與其他植物 DIRs 的進(jìn)化樹分析Fig. 2.3 Phylogenetic tree analysis of the PnDIRs with DIRs from other plants2.4.3 二級(jí)結(jié)構(gòu)分析利用PredictProtein分析7個(gè)三七PnDIRs編碼蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果7個(gè)蛋白序列中α螺旋(H)、β折疊(E)和無(wú)規(guī)則卷曲(L)所占百分比和α螺旋數(shù)及β折疊數(shù)如圖。7個(gè)蛋白中α螺旋在二級(jí)結(jié)構(gòu)中所占比例在8.11%-14.29%之間，占比最高的是PnDIR2，最低的是PnDIR7；β折疊在二級(jí)結(jié)構(gòu)中所占比例在39.9%-49.73%之間，占比最高的是PnDIR7，最低的是PnDIR2；無(wú)規(guī)則卷曲在二級(jí)結(jié)構(gòu)中所占比例在38.5%-47.45%，占比最高為PnDIR1，最低為PnDIR3。7個(gè)蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)中的α螺旋個(gè)數(shù)大多為1個(gè)，每個(gè)蛋白的起始位置都有一個(gè)α螺旋，這個(gè)α螺旋應(yīng)該是DIR蛋白的保守結(jié)構(gòu)；PnDIR2除了保守α螺旋（12-36）外，在169-172處還有一個(gè)α

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]木質(zhì)素模型化合物合成研究的現(xiàn)狀與展望[J]. 趙新坤,李赫龍,佘雕,孫潤(rùn)倉(cāng).  生物質(zhì)化學(xué)工程. 2018(01)
[2]連翹2個(gè)DIR基因的分子特征與表達(dá)分析[J]. 朱畇昊,趙樂(lè),謝小龍,李景亮,董誠(chéng)明.  中藥材. 2017(12)
[3]三七主要病害及其防治策略[J]. 張連娟,高月,董林林,尉廣飛,楊娟,陳軍文,沙本才.  世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2017(10)
[4]三七NAC轉(zhuǎn)錄因子基因PnNAC1的克隆及表達(dá)特性分析[J]. 王國(guó)東,李金晶,白智偉,關(guān)瑞攀,楊野,曲媛,崔秀明,劉迪秋.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2017(04)
[5]杜仲Dirigent蛋白編碼基因的克隆及序列分析[J]. 王維東,趙德剛,趙懿琛.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(03)
[6]丹參Dirigent基因家族的發(fā)現(xiàn)與生物信息學(xué)分析[J]. 馬金洋,楊瑾冬,李卿,張磊.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2017(04)
[7]木質(zhì)素生物合成途徑中關(guān)鍵酶基因的分子特征[J]. 武志遠(yuǎn).  農(nóng)村科學(xué)實(shí)驗(yàn). 2017(01)
[8]三七多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 陳瑞,李金晶,關(guān)瑞攀,楊野,葛鋒,崔秀明,劉迪秋.  中草藥. 2016(24)
[9]板藍(lán)根抗病毒活性成分生物合成的研究進(jìn)展[J]. 肖瑩,馬瑞芳,陳軍峰,楊穎博,張磊,陳萬(wàn)生.  世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2016(11)
[10]天然木脂素的代謝工程和合成生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 劉津,于思禮,馬雅婷,張鐵軍,趙廣榮.  中草藥. 2016(14)

碩士論文
[1]基于轉(zhuǎn)錄組分析的三七抗黑斑病關(guān)鍵基因的研究[D]. 許振寧.昆明理工大學(xué) 2016
[2]漾濞大泡核桃JsPRP1基因的克隆及功能分析[D]. 韓青.昆明理工大學(xué) 2016
[3]菘藍(lán)中木脂素生源合成途徑五個(gè)關(guān)鍵酶基因的克隆與功能分析[D]. 胡永勝.第二軍醫(yī)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：2915085