研究背景:微小RNA(microRNA,miRNA)是一類長(zhǎng)度在18-22個(gè)核苷酸,調(diào)控基因表達(dá)和轉(zhuǎn)錄的非編碼RNA。MiRNA不僅參與正常細(xì)胞的生長(zhǎng)及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,也參與腫瘤細(xì)胞的生物調(diào)控。miR-335轉(zhuǎn)錄自人常染色體7q32.2,研究證實(shí),miR-335參與癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲等過程,并能抑制乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。EphA4是促紅細(xì)胞生成素肝細(xì)胞(erythropoietin-producinghuman epato-cellular,Eph)受體家族成員,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):與良性乳腺腫瘤比較,乳腺癌組織EphA4高表達(dá),提示EphA4與乳腺癌發(fā)生相關(guān)。作為上游調(diào)控因子,miR-335對(duì)乳腺癌發(fā)生的抑制效應(yīng)是否通過干預(yù)EphA4表達(dá)而實(shí)現(xiàn),目前未見相關(guān)報(bào)道。因此,本研究以乳腺癌細(xì)胞為觀測(cè)對(duì)象,從miR-335-EphA4靶向關(guān)系、miR-335與EphA4表達(dá)調(diào)控、miR-335-EphA4信號(hào)關(guān)聯(lián)對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲干預(yù)等角度,分析EphA4靶向與miR-335抑癌作用的聯(lián)系,闡釋miR-335干預(yù)乳腺癌發(fā)生發(fā)展的可能作用。結(jié)果:1.應(yīng)用miRBase,TargetScan和PicTar分析,預(yù)測(cè)到EphA4基因可能為miR-335的下游靶基因。2.構(gòu)建EphA4野生型(wild type,WT)和突變型(mutation type,MUT)雙熒光素酶報(bào)告載體,并將其與miR-335 mimics分別共轉(zhuǎn)染雌激素受體(estrogen receptor,ER)陽性乳腺癌細(xì)胞MCF-7,和雌激素受體陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231,發(fā)現(xiàn)共轉(zhuǎn)染顯著降低野生型EphA4熒光活性,而對(duì)突變型EphA4熒光活性無影響,提示EphA4與miR-335存在靶向效應(yīng)。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和免疫印跡(Western blotting,WB)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-335 mimics轉(zhuǎn)染顯著抑制MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞EphA4表達(dá),提示miR-335負(fù)向調(diào)控EphA4表達(dá)。4.MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-335抑制MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞增殖,但該作用可被EphA4高表達(dá)限制,提示miR-335的細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)與下調(diào)EphA4相關(guān)。5.劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,EphA4促進(jìn)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移,miR-335則表現(xiàn)明顯的抑制乳腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移效應(yīng),但EphA4高表達(dá)則顯著對(duì)抗miR-335對(duì)乳腺癌細(xì)胞活動(dòng)的抑制效應(yīng),提示miR-335的細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移抑制效應(yīng)與下調(diào)EphA4相關(guān)。結(jié)論:1.EphA4是miR-335的下游靶基因。2.miR-335負(fù)向調(diào)控EphA4表達(dá)。3.EphA4促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移。4.miR-335通過下調(diào)EphA4發(fā)揮抑制乳腺癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的效應(yīng)。
【學(xué)位單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

圖2.1雙熒光素報(bào)告載體

miR-335莖環(huán)結(jié)構(gòu)

miRNA合成過程模式圖
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 陳祖錦;張斌;潘思虎;趙洪猛;張?jiān)?馮煒紅;李媛媛;曹旭晨;;ABT-737對(duì)順鉑誘導(dǎo)乳腺癌T47D細(xì)胞凋亡的增敏作用[J];中華腫瘤雜志;2011年12期

2 Mariko Oki;Hiroyuki Yamamoto;Hiroaki Taniguchi;Yasushi Adachi;Kohzoh Imai;Yasuhisa Shinomura;;Overexpression of the receptor tyrosine kinase EphA4 in human gastric cancers[J];World Journal of Gastroenterology;2008年37期

本文編號(hào)：2881203