[目的]1.觀察體外應(yīng)用醋酸棉酚(GAA)對人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞生長和凋亡的影響2.檢測體外應(yīng)用醋酸棉酚(GAA)對人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞ER、PR、c-fos基因及Dnmtl蛋白表達(dá)的影響,探討棉酚治療腫瘤的可能機(jī)制,為臨床應(yīng)用棉酚治療腫瘤提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。[方法]1.體外常規(guī)狀態(tài)下培養(yǎng)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞,采用不同濃度的醋酸棉酚(GAA)處理細(xì)胞,在倒置顯微鏡下觀察不同濃度GAA處理前后的Cal-27細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。2.應(yīng)用CCK-8法檢測在不同濃度GAA作用48h、72h前后,人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的生長變化情況,并分別計(jì)算出48h、72hGAA作用的IC50值。3.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測在不同濃度的GAA分別作用48h及72h后,人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的凋亡情況。4.應(yīng)用Western-blot技術(shù)檢測在不同濃度的GAA分別作用48h、72h后,人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞中ER、PR、c-fos以及Dnmtl基因的蛋白表達(dá)水平變化情況。[結(jié)果]1.CCK-8 檢測法顯示,2.5μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L 濃度的GAA作用人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞48h、72h,均能夠抑制人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的生長,且在一定范圍內(nèi),抑制率隨濃度以及作用時(shí)間的增加而增加。并測得48h、72h的IC5G值分別為:5.2μmol/L、3.7μmol/L。2.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,2.5μmol/L、5.0μmol/L、l0.0μmol/L 濃度的 GAA 作用人舌鱗癌 Cal-27 細(xì)胞 72h后,細(xì)胞凋亡率均較對照組升高(P0.05)。3.Western-blot檢測結(jié)果顯示,2.5μmol/L、5.0μmol/L、l0.0μmol/L 濃度的 GAA 作用人舌鱗癌 Cal-27 細(xì)胞 48h、72h后,細(xì)胞內(nèi)ER、c-fos蛋白表達(dá)水平較對照組均有升高(P0.05),Dnmtl、PR蛋白表達(dá)水平均明顯降低(P0.05)。[結(jié)論]1、在一定范圍內(nèi),GAA能夠抑制人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞的生長,且抑制率具有濃度以及時(shí)間的依賴性;2、GAA能夠誘導(dǎo)人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞發(fā)生凋亡,在一定范圍內(nèi),凋亡率隨GAA濃度以及作用時(shí)間的增加而增加;3、一定濃度的GAA能夠使人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞系中的Dnmtl、PR蛋白表達(dá)水平降低,能夠使ER、c-fos蛋白表達(dá)水平升高。
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.86
【部分圖文】：

圖１?Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ凋亡檢測原理??Ｆｉｇｌ?Ｔｈｅ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ??２．４應(yīng)用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ檢測不同濃度ＧＡＡ作用于人舌鱗癌Ｃａｌ－２７細(xì)胞４８ｈ、７２ｈＥＲ、ＰＲ、ｃ－ｆｏｓ以及Ｄｎｍｔｌ基因蛋白水平的變化??２．?４．?１?Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)原理??Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，其所檢測的物質(zhì)是蛋白質(zhì)，抗體為“探針”，用標(biāo)記的二抗來“顯色”。將通過ＰＡＧＥ分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)到硝酸纖維素薄膜上，硝酸纖維素薄膜通過非共價(jià)鍵的形式吸附蛋白質(zhì)，并且能夠保持電泳分離的蛋白質(zhì)類型以及其生物學(xué)活性不變。以硝酸纖維素薄膜上蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體發(fā)生免疫反應(yīng)，再與標(biāo)記過的第二抗體生反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。??２．?４．?２?Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)材料??

圖４?５．０［ｉｍｏｌ／Ｌ?ＧＡＡ處理４８ｈ?４０ｘ１０?

分別培養(yǎng)４８ｈ、７２ｈ，在倒置顯微鏡下觀察人舌鱗癌Ｃａｌ－２７細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞體積縮??小，連接消失，與周圍的細(xì)胞脫離，細(xì)胞質(zhì)密度增加，后期細(xì)胞死亡。并且隨著??濃度的增加以及時(shí)間的延長，對細(xì)胞增殖的影響越明顯。（見圖２－圖９）。??＾ｉ：?■?＾??圖２對照組Ｃａｌ－２７細(xì)胞培養(yǎng)４８ｈ?４〇ｘｌ〇?圖３?２．５叫１〇１／１＾＾處理４８１１?４０＞＜１０??Ｆｉｇ２?Ｃａｌ－２７?ｃｅｌｌｓ?ｏｆ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｆｏｒ?４８ｈ?Ｆｉｇ３?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ?２．５?＾ｍｏｌ／Ｌ?ＧＡＡ?ｆｏｒ?４８ｈ??＇?／?Ｖ４”?心??ｎ?＾?＾?ｈ?＾??—）??￥?－：?ｔ??Ｋｍ?—?＇ｄ??圖４?５．０［ｉｍｏｌ／Ｌ?ＧＡＡ處理４８ｈ?４０ｘ１０?圖５?ｌａＯｐｍｏｌ／ＬＧＡＡ處理４８ｈ?４〇ｘｌ〇??Ｆｉｇ４?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ?５．０｜ｉｍｏｌ／Ｌ?ＧＡＡ?ｆｏｒ?４８ｈ?Ｆｉｇ５?ｔｒｅａｔｅｄ?ｂｙ?１０．０［ｉｍｏｌ／Ｌ?ＧＡＡ?ｆｏｒ?４８ｈ??２０??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 何人可;冉晨曦;湯小玲;鐘建斌;郭忠;;新型棉酚衍生物Apogossypolone的抗腫瘤作用研究概況[J];中國藥房;2015年31期

2 姚嘉;李冠喬;鐘曉捷;湯鵬;;雌激素受體與孕激素受體的表達(dá)水平與乳腺癌臨床病理相關(guān)性分析及聯(lián)檢意義[J];中國婦幼保健;2015年23期

3 王秀艷;吳紅霞;董艷;;雌激素受體、孕激素受體在老年子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)及其臨床意義[J];中國生化藥物雜志;2015年05期

4 楊丹;王麗;李珠;劉趙陽;劉暢;郭麗;付佳;祁榮;王俊平;;棉酚通過Akt/β-catenin通路抑制胃癌細(xì)胞遷移[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2015年06期

5 張艷霞;;米非司酮聯(lián)合復(fù)方醋酸棉酚治療功能性子宮出血的效果觀察[J];中國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理;2015年07期

6 盧明東;孫維建;李丕宏;俞耀軍;游濤;王飛海;鄭志強(qiáng);;棉酚誘導(dǎo)人胃癌MGC-803細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究[J];中藥材;2014年12期

7 陳文飛;付帥;岳萬遠(yuǎn);吳勇;;醋酸棉酚對人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞hMLH1基因甲基化和mRNA表達(dá)的影響[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2014年04期

8 李天曉;元剛;葉麗君;孫健;黎曙霞;;棉酚衍生物ApoG2誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡及對Wnt6調(diào)控作用的研究[J];新醫(yī)學(xué);2014年06期

9 周海豐;范玉宏;武雪亮;孫喜斌;王立坤;梁晚平;劉運(yùn)江;;IHC和FISH檢測乳腺癌HER-2與ER、PR、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年02期

10 李國停;謝淑武;朱焰;;男性節(jié)育藥物的研發(fā)進(jìn)展[J];中國新藥雜志;2014年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 楊樂;醋酸棉酚對人舌鱗癌Cal-27細(xì)胞ER基因甲基化及ER、PR、c-fos基因mRNA表達(dá)的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年

2 石豐榕;ApoG2及聯(lián)合放射治療誘導(dǎo)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞凋亡與自噬的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號：2871997