目的:NF-κB是一種調(diào)控數(shù)百種基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子,它調(diào)控的基因涉及免疫,炎癥,凋亡,增殖等。白屈菜堿為苯并菲啶類生物堿,是在篩選NF-κB抑制劑時,發(fā)現(xiàn)的的一種源自天然產(chǎn)物并且有效的小分子抑制劑。據(jù)報道它具有抗炎的藥理學(xué)活性。然而,其抗炎的分子機(jī)制尚不清楚。所以,我們研究了白屈菜堿對NF-λB活化的影響。方法:①使用MTT實驗檢測白屈菜堿對HCT116細(xì)胞存活率的影響;②使用熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測白屈菜堿對TNF-αa誘導(dǎo)的NF-1κB轉(zhuǎn)錄活性的影響;③使用蛋白免疫印跡法檢測白屈菜堿對TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB和MAPK信號通路及靶蛋白表達(dá)的影響;④使用RT-PCR和rael-timePCR實驗檢測白屈菜堿對TNF-α誘導(dǎo)的iNOS,IL-8和MCP1的mRNA表達(dá)水平的影響;⑤使用免疫熒光實驗探測HCT116細(xì)胞中白屈菜堿對TNF-α誘導(dǎo)的p65的核定位情況的影響;⑥使用流式細(xì)胞術(shù)檢測白屈菜堿對TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響。⑦EdU實驗、細(xì)胞集落實驗用于檢測HCT116細(xì)胞中白屈菜堿對TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:1.白屈菜堿抑制TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性并其不是由于細(xì)胞毒性引起的。2.白屈菜堿劑量性的抑制TNF-α誘導(dǎo)的IκBα的磷酸化和降解及p65的核轉(zhuǎn)移,同時也抑制NF-κB靶基因的表達(dá)。3.白屈菜堿劑量性抑制TNF-α誘導(dǎo)的p-p38和p-JNK的表達(dá)。盡管PDTC(100 μM)也可以抑制TNF-α誘導(dǎo)的p-p38和p-JNK的表達(dá),并對p-ERK沒有明顯影響。但是白屈菜堿可以更好的抑制p-p38的表達(dá)。4.白屈菜堿劑量性抑制iNOS,IL-8和MCP1的mRNA表達(dá)水平并且抑制與細(xì)胞凋亡和增殖有關(guān)的NF-κB下游靶蛋白的表達(dá)。5.白屈菜堿促進(jìn)TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。6.細(xì)胞集落實驗和EdU實驗證明白屈菜堿抑制HCT116細(xì)胞的增殖。結(jié)論:白屈菜堿抑制TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性并抑制與細(xì)胞凋亡、增殖、炎性因子相關(guān)的蛋白質(zhì)和mRNA的表達(dá);白屈菜堿能夠促進(jìn)TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果表明,白屈菜堿可能成為治療炎性疾病的潛在藥物。
【學(xué)位單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

ｍＣ?ｍｍｍｍｒｎ?Ｔ?￣ｉ?Ｑ??圖１－２?ＩｋＢ結(jié)構(gòu)示意圖??１．１．３?ＩＫＫ復(fù)合物??ＩＫＫｃｔ，?ＩＫＫｐ和ＮＥＭＯ組成ＩＫＫ激酶復(fù)合物。重組ＮＥＭＯ與ＩＫＫａ或??ＩＫＫｐ組裝成復(fù)合物，其表觀分子量與純化復(fù)合物相似［３６，３７］。ＩＫＫａ在非經(jīng)典信??號傳導(dǎo)途徑中是必要的然而在經(jīng)典信號傳導(dǎo)途徑中并不是必要的［３８，３９］。ＩＫＫａ在??所有途徑中都不需要降解，但ＩＫＫａ在ＮＦ－ｋＢ依賴性基因表達(dá)的經(jīng)典信號傳導(dǎo)??途徑中起重要作用。ＮＥＭＯ在經(jīng)典的ＮＦ－ｋＢ的信號傳導(dǎo)途徑中是必需的，并??且ＮＥＭＯ缺陷的小鼠死于大量肝細(xì)胞凋亡的胚胎中。與ＩＫＫ（３敲除細(xì)胞相比，??ＮＥＭＯ缺陷型細(xì)胞表現(xiàn)出更嚴(yán)重和更廣泛的ＮＦ－ｋＢ活化損失，表明一些典型??信號途徑中缺乏ＩＫＫＰ也是完整的％

圖１－２?ＩｋＢ結(jié)構(gòu)示意圖??１．１．３?ＩＫＫ

位論文?白屈菜堿ＮＦ－ｋＢ活化及相應(yīng)靶第三章結(jié)果??菜堿抑制ＮＦ－ｋＢ的轉(zhuǎn)錄活性??宄白屈菜堿對ＴＮＦ－ａ誘導(dǎo)的ＮＦ－ｋＢ轉(zhuǎn)錄活性的影響，因?qū)嶒灐ⅲ危疲耄抡{(diào)節(jié)的螢光素酶報告基因載體轉(zhuǎn)染白屈菜堿與ＴＮＦ－ｃｔ共同處理細(xì)胞。結(jié)果顯示，白屈菜抑制報告基因的表達(dá)，并且在ＴＮＦ－ａ刺激下，白屈菜ＮＦ－ｋＢ抑制劑，１００?ｐＭ）抑制ＮＦ－ｋＢ報告基因表達(dá)＂７???
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Sakineh Kazemi Noureini;Michael Wink;;Transcriptional down regulation of hTERT and senescence induction in HepG2 cells by chelidonine[J];World Journal of Gastroenterology;2009年29期

本文編號：2860254