目的:NF-κB是一種調控數(shù)百種基因表達的轉錄因子,它調控的基因涉及免疫,炎癥,凋亡,增殖等。白屈菜堿為苯并菲啶類生物堿,是在篩選NF-κB抑制劑時,發(fā)現(xiàn)的的一種源自天然產物并且有效的小分子抑制劑。據(jù)報道它具有抗炎的藥理學活性。然而,其抗炎的分子機制尚不清楚。所以,我們研究了白屈菜堿對NF-λB活化的影響。方法:①使用MTT實驗檢測白屈菜堿對HCT116細胞存活率的影響;②使用熒光素酶報告基因實驗檢測白屈菜堿對TNF-αa誘導的NF-1κB轉錄活性的影響;③使用蛋白免疫印跡法檢測白屈菜堿對TNF-α誘導的NF-κB和MAPK信號通路及靶蛋白表達的影響;④使用RT-PCR和rael-timePCR實驗檢測白屈菜堿對TNF-α誘導的iNOS,IL-8和MCP1的mRNA表達水平的影響;⑤使用免疫熒光實驗探測HCT116細胞中白屈菜堿對TNF-α誘導的p65的核定位情況的影響;⑥使用流式細胞術檢測白屈菜堿對TNF-α誘導的細胞凋亡的影響。⑦EdU實驗、細胞集落實驗用于檢測HCT116細胞中白屈菜堿對TNF-α誘導的細胞增殖的影響。結果:1.白屈菜堿抑制TNF-α誘導的NF-κB的轉錄活性并其不是由于細胞毒性引起的。2.白屈菜堿劑量性的抑制TNF-α誘導的IκBα的磷酸化和降解及p65的核轉移,同時也抑制NF-κB靶基因的表達。3.白屈菜堿劑量性抑制TNF-α誘導的p-p38和p-JNK的表達。盡管PDTC(100 μM)也可以抑制TNF-α誘導的p-p38和p-JNK的表達,并對p-ERK沒有明顯影響。但是白屈菜堿可以更好的抑制p-p38的表達。4.白屈菜堿劑量性抑制iNOS,IL-8和MCP1的mRNA表達水平并且抑制與細胞凋亡和增殖有關的NF-κB下游靶蛋白的表達。5.白屈菜堿促進TNF-α誘導的細胞凋亡。6.細胞集落實驗和EdU實驗證明白屈菜堿抑制HCT116細胞的增殖。結論:白屈菜堿抑制TNF-α誘導的NF-κB的轉錄活性并抑制與細胞凋亡、增殖、炎性因子相關的蛋白質和mRNA的表達;白屈菜堿能夠促進TNF-α誘導的細胞凋亡。這些結果表明,白屈菜堿可能成為治療炎性疾病的潛在藥物。
【學位單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285
【部分圖文】：

ｍＣ?ｍｍｍｍｒｎ?Ｔ?￣ｉ?Ｑ??圖１－２?ＩｋＢ結構示意圖??１．１．３?ＩＫＫ復合物??ＩＫＫｃｔ，?ＩＫＫｐ和ＮＥＭＯ組成ＩＫＫ激酶復合物。重組ＮＥＭＯ與ＩＫＫａ或??ＩＫＫｐ組裝成復合物，其表觀分子量與純化復合物相似［３６，３７］。ＩＫＫａ在非經典信??號傳導途徑中是必要的然而在經典信號傳導途徑中并不是必要的［３８，３９］。ＩＫＫａ在??所有途徑中都不需要降解，但ＩＫＫａ在ＮＦ－ｋＢ依賴性基因表達的經典信號傳導??途徑中起重要作用。ＮＥＭＯ在經典的ＮＦ－ｋＢ的信號傳導途徑中是必需的，并??且ＮＥＭＯ缺陷的小鼠死于大量肝細胞凋亡的胚胎中。與ＩＫＫ（３敲除細胞相比，??ＮＥＭＯ缺陷型細胞表現(xiàn)出更嚴重和更廣泛的ＮＦ－ｋＢ活化損失，表明一些典型??信號途徑中缺乏ＩＫＫＰ也是完整的％

圖１－２?ＩｋＢ結構示意圖??１．１．３?ＩＫＫ

位論文?白屈菜堿ＮＦ－ｋＢ活化及相應靶第三章結果??菜堿抑制ＮＦ－ｋＢ的轉錄活性??宄白屈菜堿對ＴＮＦ－ａ誘導的ＮＦ－ｋＢ轉錄活性的影響，因實驗。將ＮＦ－ｋＢ調節(jié)的螢光素酶報告基因載體轉染白屈菜堿與ＴＮＦ－ｃｔ共同處理細胞。結果顯示，白屈菜抑制報告基因的表達，并且在ＴＮＦ－ａ刺激下，白屈菜ＮＦ－ｋＢ抑制劑，１００?ｐＭ）抑制ＮＦ－ｋＢ報告基因表達＂７???
【參考文獻】

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1 Sakineh Kazemi Noureini;Michael Wink;;Transcriptional down regulation of hTERT and senescence induction in HepG2 cells by chelidonine[J];World Journal of Gastroenterology;2009年29期

本文編號：2860254