發(fā)布時間：2020-10-21 11:19

　　 多疣壁虎(Gekko japonicus)是一種小型夜行性爬行動物,屬于爬行綱(Reptilia),有鱗目(Squamata),壁虎科(Gekkonidae),壁虎屬(Gekko),為溫度依賴型性別決定(TSD)物種。本文野外采集多疣壁虎懷卵母體,進行卵孵化實驗和外源激素操縱實驗,檢測多疣壁虎在不同孵化溫度下后代性比,驗證其溫度依賴型性別決定模式;通過基因克隆技術(shù)獲得多疣壁虎Dmrt1基因序列;通過qPCR技術(shù)檢測Dmrt1基因不同組織表達以及在多疣壁虎性別決定中的表達模式,探討了Dmrt 基因在多疣壁虎性別決定中可能發(fā)揮的作用,為進一步探究Dmrt1基因在溫度依賴型性別決定的機制研究提供基礎(chǔ)信息。1.激素操縱對多疣壁虎性別的影響孵化溫度顯著影響多疣壁虎后代性比,多疣壁虎屬于TSD物種。但是溫度并不能完全決定后代性別,通過芳香化酶抑制劑,消除溫度對后代性別的影響,結(jié)果顯示,芳香化酶作用后,在三個孵化溫度下,雌性性別顯著下降,但也沒能完全逆轉(zhuǎn)后代性別。本文研究進一步證明多疣壁虎屬于TSD物種,同時實驗結(jié)果支持多疣壁虎可能存在GSD性別決定模式,這一結(jié)果支持TSD-GSD很可能存在過渡的連續(xù)譜假說。2.Dmrt1基因克隆、序列分析本實驗利用3'和5'RACE技術(shù)從多疣壁虎精巢中克隆出Dmrt1基因序列,Dmrt1長1884 bp,包括3'/5'非編碼區(qū)和ORF開放閱讀框。ORF編碼285個氨基酸,蛋白質(zhì)分子量為30.94 kDa,等電點為4.95。開放閱讀框ORF從第85位核苷酸至第939位核苷酸。并對Dmrt1蛋白序列進行預(yù)測。利用Dmrt1蛋白預(yù)測序列進行多重比較分析,發(fā)現(xiàn)Dmrt1 基因的三段保守區(qū)段(DM binding domain, a P/S-rich region和male-specific motif)在脊椎動物中高度保守。系統(tǒng)樹分析也表明多疣壁虎Dmrt1氨基酸序列在脊椎動物中同樣高度保守。3.多疣壁虎Dmrt1基因不同組織表達及性別決定中的表達模式結(jié)果表明Dmrt1基因在多疣壁虎精巢中的表達量顯著高于卵巢。同時我們還檢測了其它雄性性別相關(guān)基因,Sox9、Sf1、AMH、Lhx9和WT1基因,結(jié)果精巢中的表達量同樣顯著高于卵巢。我們在多疣壁虎出蟄至繁殖期間檢測其精巢中Dmrt1基因的表達量,結(jié)果顯示Dmrt1基因在四月份精巢復(fù)蘇階段表達量達到顯著水平,說明Dmrt1基因可能參與多疣壁虎精子發(fā)生;在產(chǎn)雄性后代較多的28℃和產(chǎn)雌性后代較多的32℃孵化溫度下孵化多疣壁虎卵,在TSP時期檢測不同發(fā)育時期Dmrt1基因的表達量,結(jié)果顯示28℃孵化溫度下,第35期時Dmrt1基因的表達量顯著高于32℃,我們推測Dmrt1基因可能參與多疣壁虎雄性性別決定過程。
【學(xué)位單位】：溫州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：Q78
【部分圖文】：

代；比如喙頭目）、ＦＭ模式（較低孵化溫度產(chǎn)生雌性后代，較高孵化溫度產(chǎn)生雄??性后代；比如龜鱉目）和ＦＭＦ模式（較高和較低孵化溫度均產(chǎn)生雌性后代，中??間孵化溫度產(chǎn)生雄性后代；比如鱷目和蜥蜴亞目）１５Ｊ５］（圖１－１）。Ｉｎａｍｄａｒ等［叫在??２０１２年的研宄發(fā)現(xiàn)，變色樹蜥（Ｑｊ／ｏｒｅｓｖｅｒ＾ｃｏ／ｏｒ）存在著一種新的性別決定模??１??

１實驗動物??我們于２０１４年５月中旬在浙江溫州（２７°８＇?Ｎ，１２０°６２ｒ?Ｅ）采集多疣壁虎懷卵??母體（圖２－１）。帶回溫州大學(xué)實驗室室溫飼養(yǎng)，詞養(yǎng)籠放置于不受千擾，通風(fēng)、??具自然采光、陽光能自然照射的防雨環(huán)境中。內(nèi)放隱蔽物，如雞蛋托、瓦片等。??每隔２ｄ投喂１次，主要餌料為面包蟲、蟋蟀、果蠅等，在食物和曝曬過的自來??水中添加鈣和維生素，及時清除掉糞便及死亡的剩余食物。懷卵母體在捕獲后的??３－８天后產(chǎn)卵。?????圖２－１多疣壁虎在中國大陸的分布情況；圖中黑點表示多疣壁虎的采集點。??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｇｅｋｋｏ?ｊａｐｏｎｉｃｕｓ?ｉｎ?Ｃｈｉｎａ?Ｍａｉｎｌａｎｄ；?Ｓｏｌｉｄ?ｄｏｔｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｔｈｅ??ｓａｍｐｌｉｎｇ?ｓｉｔｅｓ?ｏｆ?Ｇｅｋｋｏ?ｊａｐｏｎｉｃｕｓ．??１０??

１實驗動物??我們于２０１４年５月中旬在浙江溫州（２７°８＇?Ｎ，１２０°６２ｒ?Ｅ）采集多疣壁虎懷卵??母體（圖２－１）。帶回溫州大學(xué)實驗室室溫飼養(yǎng)，詞養(yǎng)籠放置于不受千擾，通風(fēng)、??具自然采光、陽光能自然照射的防雨環(huán)境中。內(nèi)放隱蔽物，如雞蛋托、瓦片等。??每隔２ｄ投喂１次，主要餌料為面包蟲、蟋蟀、果蠅等，在食物和曝曬過的自來??水中添加鈣和維生素，及時清除掉糞便及死亡的剩余食物。懷卵母體在捕獲后的??３－８天后產(chǎn)卵。?????圖２－１多疣壁虎在中國大陸的分布情況；圖中黑點表示多疣壁虎的采集點。??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｇｅｋｋｏ?ｊａｐｏｎｉｃｕｓ?ｉｎ?Ｃｈｉｎａ?Ｍａｉｎｌａｎｄ；?Ｓｏｌｉｄ?ｄｏｔｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｔｈｅ??ｓａｍｐｌｉｎｇ?ｓｉｔｅｓ?ｏｆ?Ｇｅｋｋｏ?ｊａｐｏｎｉｃｕｓ．??１０??
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號：2850052