多疣壁虎(Gekko japonicus)是一種小型夜行性爬行動(dòng)物,屬于爬行綱(Reptilia),有鱗目(Squamata),壁虎科(Gekkonidae),壁虎屬(Gekko),為溫度依賴型性別決定(TSD)物種。本文野外采集多疣壁虎懷卵母體,進(jìn)行卵孵化實(shí)驗(yàn)和外源激素操縱實(shí)驗(yàn),檢測(cè)多疣壁虎在不同孵化溫度下后代性比,驗(yàn)證其溫度依賴型性別決定模式;通過(guò)基因克隆技術(shù)獲得多疣壁虎Dmrt1基因序列;通過(guò)qPCR技術(shù)檢測(cè)Dmrt1基因不同組織表達(dá)以及在多疣壁虎性別決定中的表達(dá)模式,探討了Dmrt 基因在多疣壁虎性別決定中可能發(fā)揮的作用,為進(jìn)一步探究Dmrt1基因在溫度依賴型性別決定的機(jī)制研究提供基礎(chǔ)信息。1.激素操縱對(duì)多疣壁虎性別的影響孵化溫度顯著影響多疣壁虎后代性比,多疣壁虎屬于TSD物種。但是溫度并不能完全決定后代性別,通過(guò)芳香化酶抑制劑,消除溫度對(duì)后代性別的影響,結(jié)果顯示,芳香化酶作用后,在三個(gè)孵化溫度下,雌性性別顯著下降,但也沒(méi)能完全逆轉(zhuǎn)后代性別。本文研究進(jìn)一步證明多疣壁虎屬于TSD物種,同時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果支持多疣壁虎可能存在GSD性別決定模式,這一結(jié)果支持TSD-GSD很可能存在過(guò)渡的連續(xù)譜假說(shuō)。2.Dmrt1基因克隆、序列分析本實(shí)驗(yàn)利用3'和5'RACE技術(shù)從多疣壁虎精巢中克隆出Dmrt1基因序列,Dmrt1長(zhǎng)1884 bp,包括3'/5'非編碼區(qū)和ORF開(kāi)放閱讀框。ORF編碼285個(gè)氨基酸,蛋白質(zhì)分子量為30.94 kDa,等電點(diǎn)為4.95。開(kāi)放閱讀框ORF從第85位核苷酸至第939位核苷酸。并對(duì)Dmrt1蛋白序列進(jìn)行預(yù)測(cè)。利用Dmrt1蛋白預(yù)測(cè)序列進(jìn)行多重比較分析,發(fā)現(xiàn)Dmrt1 基因的三段保守區(qū)段(DM binding domain, a P/S-rich region和male-specific motif)在脊椎動(dòng)物中高度保守。系統(tǒng)樹分析也表明多疣壁虎Dmrt1氨基酸序列在脊椎動(dòng)物中同樣高度保守。3.多疣壁虎Dmrt1基因不同組織表達(dá)及性別決定中的表達(dá)模式結(jié)果表明Dmrt1基因在多疣壁虎精巢中的表達(dá)量顯著高于卵巢。同時(shí)我們還檢測(cè)了其它雄性性別相關(guān)基因,Sox9、Sf1、AMH、Lhx9和WT1基因,結(jié)果精巢中的表達(dá)量同樣顯著高于卵巢。我們?cè)诙囵啾诨⒊鱿U至繁殖期間檢測(cè)其精巢中Dmrt1基因的表達(dá)量,結(jié)果顯示Dmrt1基因在四月份精巢復(fù)蘇階段表達(dá)量達(dá)到顯著水平,說(shuō)明Dmrt1基因可能參與多疣壁虎精子發(fā)生;在產(chǎn)雄性后代較多的28℃和產(chǎn)雌性后代較多的32℃孵化溫度下孵化多疣壁虎卵,在TSP時(shí)期檢測(cè)不同發(fā)育時(shí)期Dmrt1基因的表達(dá)量,結(jié)果顯示28℃孵化溫度下,第35期時(shí)Dmrt1基因的表達(dá)量顯著高于32℃,我們推測(cè)Dmrt1基因可能參與多疣壁虎雄性性別決定過(guò)程。
【學(xué)位單位】：溫州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：Q78
【部分圖文】：

代；比如喙頭目）、ＦＭ模式（較低孵化溫度產(chǎn)生雌性后代，較高孵化溫度產(chǎn)生雄??性后代；比如龜鱉目）和ＦＭＦ模式（較高和較低孵化溫度均產(chǎn)生雌性后代，中??間孵化溫度產(chǎn)生雄性后代；比如鱷目和蜥蜴亞目）１５Ｊ５］（圖１－１）。Ｉｎａｍｄａｒ等［叫在??２０１２年的研宄發(fā)現(xiàn)，變色樹蜥（Ｑｊ／ｏｒｅｓｖｅｒ＾ｃｏ／ｏｒ）存在著一種新的性別決定模??１??

１實(shí)驗(yàn)動(dòng)物??我們于２０１４年５月中旬在浙江溫州（２７°８＇?Ｎ，１２０°６２ｒ?Ｅ）采集多疣壁虎懷卵??母體（圖２－１）。帶回溫州大學(xué)實(shí)驗(yàn)室室溫飼養(yǎng)，詞養(yǎng)籠放置于不受千擾，通風(fēng)、??具自然采光、陽(yáng)光能自然照射的防雨環(huán)境中。內(nèi)放隱蔽物，如雞蛋托、瓦片等。??每隔２ｄ投喂１次，主要餌料為面包蟲、蟋蟀、果蠅等，在食物和曝曬過(guò)的自來(lái)??水中添加鈣和維生素，及時(shí)清除掉糞便及死亡的剩余食物。懷卵母體在捕獲后的??３－８天后產(chǎn)卵。?????圖２－１多疣壁虎在中國(guó)大陸的分布情況；圖中黑點(diǎn)表示多疣壁虎的采集點(diǎn)。??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｇｅｋｋｏ?ｊａｐｏｎｉｃｕｓ?ｉｎ?Ｃｈｉｎａ?Ｍａｉｎｌａｎｄ；?Ｓｏｌｉｄ?ｄｏｔｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｔｈｅ??ｓａｍｐｌｉｎｇ?ｓｉｔｅｓ?ｏｆ?Ｇｅｋｋｏ?ｊａｐｏｎｉｃｕｓ．??１０??

１實(shí)驗(yàn)動(dòng)物??我們于２０１４年５月中旬在浙江溫州（２７°８＇?Ｎ，１２０°６２ｒ?Ｅ）采集多疣壁虎懷卵??母體（圖２－１）。帶回溫州大學(xué)實(shí)驗(yàn)室室溫飼養(yǎng)，詞養(yǎng)籠放置于不受千擾，通風(fēng)、??具自然采光、陽(yáng)光能自然照射的防雨環(huán)境中。內(nèi)放隱蔽物，如雞蛋托、瓦片等。??每隔２ｄ投喂１次，主要餌料為面包蟲、蟋蟀、果蠅等，在食物和曝曬過(guò)的自來(lái)??水中添加鈣和維生素，及時(shí)清除掉糞便及死亡的剩余食物。懷卵母體在捕獲后的??３－８天后產(chǎn)卵。?????圖２－１多疣壁虎在中國(guó)大陸的分布情況；圖中黑點(diǎn)表示多疣壁虎的采集點(diǎn)。??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｇｅｋｋｏ?ｊａｐｏｎｉｃｕｓ?ｉｎ?Ｃｈｉｎａ?Ｍａｉｎｌａｎｄ；?Ｓｏｌｉｄ?ｄｏｔｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｔｈｅ??ｓａｍｐｌｉｎｇ?ｓｉｔｅｓ?ｏｆ?Ｇｅｋｋｏ?ｊａｐｏｎｉｃｕｓ．??１０??
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2850052