細(xì)胞分裂素是重要的植物激素,參與植物生長(zhǎng)發(fā)育的眾多方面,然而目前有關(guān)其代謝及轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的研究還存在許多盲點(diǎn)。本研究以擬南芥中At ABCG14基因參與細(xì)胞分裂素外運(yùn)為參考克隆分析了葡萄中直系同源VviABCG14基因及可能與其互作的蛋白基因,通過膜蛋白酵母雙雜交和雙分子熒光互補(bǔ)篩選并驗(yàn)證互作蛋白,探索其在不同敗育程度不同果實(shí)大小的葡萄品種以及不同外源植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理下的表達(dá)差異,同時(shí)構(gòu)建RNAi干擾載體和過表達(dá)載體,通過穩(wěn)定整合對(duì)基因VviABCG14的功能進(jìn)行初步探究。獲得主要研究結(jié)果如下:1、克隆了‘黑比諾’葡萄VviABCG14及預(yù)測(cè)的互作蛋白基因VviABCG7、VviABCG11.1、VviABCG11.3、VviABCG11.4、VviABCG11.7、VviABCG15.1、VviABCG21的cDNA序列。各基因開放閱讀框長(zhǎng)1968-2190bp,編碼氨基酸數(shù)656-730aa。序列中有多個(gè)保守結(jié)構(gòu)位點(diǎn),均含有Walker A、Walker B、ABC信號(hào)基序、H環(huán)、Q環(huán)等五個(gè)ABCG半分子家族特有的特征基序或環(huán)。2、用基于分裂泛素的酵母雙雜交系統(tǒng)和雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)對(duì)可能互作的蛋白進(jìn)行了篩選驗(yàn)證,酵母雙雜交顯示基因VviABCG14和VviABCG7編碼蛋白有相互作用,進(jìn)一步的雙分子熒光互補(bǔ)驗(yàn)證了此結(jié)果�；騐viABCG7編碼蛋白可能與自身形成同源二聚體。亞細(xì)胞定位顯示基因VviABCG14和VviABCG7編碼蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)膜上。3、分析了基因VviABCG14、VviABCG7在不同組織器官、不同敗育程度不同果實(shí)大小葡萄品種以及不同外源植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理下的表達(dá)差異。VviABCG14基因在葡萄各組織器官中均有一定量的表達(dá),而VviABCG7只在葉片中表達(dá)量很高,VviABCG14基因在不同時(shí)期胚珠中表達(dá)量明顯高于VviABCG7。CPPU和tZT處理果實(shí)后,VviABCG7基因表達(dá)量有明顯的升高,而GA_3處理后有下降,VviABCG14基因表達(dá)情況相反。GA_3處理葉片后VviABCG7的基因表達(dá)明顯上調(diào),而MeJA處理后表達(dá)明顯下調(diào),五種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理后24h VviABCG14基因表達(dá)量均有明顯升高。4、構(gòu)建了VviABCG14基因的過表達(dá)和擬南芥中直系同源基因At ABCG14的RNAi干擾載體。獲得擬南芥VviABCG14基因的過表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系,與對(duì)照Col-0相比,播種后12d T_3代轉(zhuǎn)基因型擬南芥幼苗生長(zhǎng)更旺盛,播種后26d轉(zhuǎn)基因株系幼苗抽薹率明顯低于野生型。同等條件下播種后12d轉(zhuǎn)基因型擬南芥根長(zhǎng)高于野生型,且差異顯著。5、鑒定出10個(gè)葡萄VviCKXs家族基因,并克隆且測(cè)序完成了其中7個(gè)基因的cDNA全長(zhǎng)。其在不同組織器官、不同胚珠發(fā)育時(shí)期以及不同外源植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理下的表達(dá)差異分析顯示,每個(gè)基因在花和花蕾中均有較高的表達(dá)量,除基因VviCKX6和VviCKX7外,在胚珠發(fā)育各時(shí)期‘無(wú)核白’中表達(dá)量都要高于‘黑比諾’。VviCKX5在卷須中表達(dá)量高,VviCKX7在根和莖中表達(dá)量高。VviCKX6在花蕾和果皮中有明顯表達(dá)。6-BA處理使VviCKX3a、VviCKX3c、VviCKX3-like1基因表達(dá)上調(diào),而其他的VviCKX3基因?qū)?-BA無(wú)明顯響應(yīng)。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S663.1
【部分圖文】：

圖 3-2 葡萄和擬南芥 ABCG 蛋白序列聚類分析Figure 3-2 Cluster analysis of Vitis vinifera and Arabidopsis thaliana ABCG proteins

胞分裂素代謝相關(guān)基因 VviABCG14 及 VviCKX第三章 結(jié)果與分析4 及其互作蛋白基因克隆與分析ABCG14 及預(yù)測(cè)的互作蛋白基因 VviAG11.4、VviABCG11.7、VviABCG15.1、V結(jié)果顯示 VviABCG14 基因 cDNA 2103b基酸，VviABCG7 基因 cDNA 2322bp，開放余各基因 ORF 長(zhǎng) 1968-2118bp，編碼氨

圖 3-3 葡萄和擬南芥 ABCG 蛋白多序列比對(duì)Figure 3-3 Multi-sequence alignment of ABCG proteins in Vitis vinifera and Arabidopsis thaliana
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2848211