【摘要】：近年來,我國(guó)爆發(fā)了嚴(yán)重的豬腹瀉疫情,對(duì)我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。病毒細(xì)菌等病原微生物的感染、環(huán)境和飼養(yǎng)條件不當(dāng)?shù)榷际且鹭i腹瀉的原因,其中病毒感染是引起豬腹瀉的一個(gè)主要因素,常見的能引起豬腹瀉的病毒主要有豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬輪狀病毒(RV)和豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)。但近年來養(yǎng)豬業(yè)常用的PEDV/TGEV二聯(lián)疫苗和PEDV/TGEV/RV三聯(lián)疫苗經(jīng)常出現(xiàn)免疫失敗的現(xiàn)象。研究發(fā)現(xiàn),一些新的病毒如豬德爾塔冠狀病毒(PDCoV)和豬阿爾法冠狀病毒(PEAV)等也能夠引起豬的腹瀉;另外,還有一些可能與豬腹瀉有關(guān)的病毒,如豬嵴病毒(PKV)。PKV屬于微小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)病毒,為單股正鏈RNA病毒,無囊膜,于2016年國(guó)際病毒分類委員會(huì)正式確立其為嵴病毒屬(Kobuvirus)成員。2007年在匈牙利PKV首次被發(fā)現(xiàn),隨后在世界范圍內(nèi)均有檢出,且檢出率較高,但其是否致病、致病機(jī)制目前尚不清楚。大量研究證明,PKV在腹瀉豬群中的檢出率高于非腹瀉豬群,多數(shù)研究者猜測(cè),該病毒可能與豬的腹瀉有關(guān)。但也有部分研究指出,該病毒在非腹瀉豬群中的檢出率高于腹瀉豬群。本研究根據(jù)PKV的3D區(qū)保守序列設(shè)計(jì)的一對(duì)引物對(duì)來自山東省11個(gè)城市43所豬場(chǎng)的豬小腸內(nèi)容物和糞便共計(jì)634份樣品,進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)和統(tǒng)計(jì),調(diào)查了PKV在山東省部分縣市的流行情況。結(jié)果顯示,在634份樣品中,PKV陽性率為39.91%(253/634),其中腹瀉豬個(gè)體陽性率為28.90%(63/218),而非腹瀉豬個(gè)體陽性率為45.67%(190/416)。數(shù)據(jù)顯示,采集病料中PKV的檢出率很高,說明PKV在山東省地區(qū)的感染十分普遍,而未發(fā)生腹瀉豬群的PKV檢出率遠(yuǎn)高于發(fā)生腹瀉的豬群,本研究表明山東省范圍內(nèi)PKV感染與豬腹瀉之間無必然聯(lián)系,PKV在豬腹瀉的爆發(fā)中可能并不是起主導(dǎo)作用的病原體。通過對(duì)采集樣品的豬群不同的生長(zhǎng)階段統(tǒng)計(jì)可以看出,哺乳仔豬、斷奶仔豬、育肥豬及成年豬的PKV陽性率為48.31%(100/207)、34.78%(48/138)、27.75%(63/227)和67.74%(42/62),這說明PKV在山東豬群中各個(gè)日齡時(shí)期均有感染,且感染率普遍較高。對(duì)不同季節(jié)豬群PKV的檢測(cè)統(tǒng)計(jì)可以看出,山東省豬群中PKV的攜帶率具有明顯的季節(jié)差異,夏秋季節(jié)的PKV陽性率(53.42%,117/219)明顯高于冬春季節(jié)(32.77%,136/415),與豬流行性腹瀉爆發(fā)的季節(jié)相反,這進(jìn)一步說明了PKV在豬腹瀉中可能并不是起主導(dǎo)作用。對(duì)不同品種類型的豬群PKV檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),地方品種的陽性率最高為69.06%(96/139),其次是外三元,陽性率為33.73%(140/415),內(nèi)三元的PKV陽性率在三者中最低,為21.25%(17/80)。本研究對(duì)PKV檢測(cè)的同時(shí),也對(duì)能夠引起豬腹瀉的PEDV、TGEV、RV、PDCoV和PEAV進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示,PKV與PEDV、TGEV之間存在著明顯的混合感染,對(duì)腹瀉豬群和非腹瀉豬群的混合感染數(shù)據(jù)比對(duì)顯示,雖然PKV在非腹瀉豬群中單獨(dú)感染率遠(yuǎn)高于腹瀉豬群,但非腹瀉豬群PKV與PEDV和TGEV的混合感染率卻明顯低于腹瀉豬群。由于PEDV和TGEV等病毒是引起豬腹瀉的主要和常見原因,因此不能確定PKV在引起豬腹瀉的過程是否發(fā)揮作用,推測(cè)PKV可能在豬腹瀉的過程中作為協(xié)同病原發(fā)揮作用,而一般情況下并不具備單獨(dú)感染導(dǎo)致豬腹瀉的能力。本研究通過對(duì)PKV VP1基因兩端的序列進(jìn)行比對(duì)分析,設(shè)計(jì)了一對(duì)引物通過PCR方法擴(kuò)增出完整的VP1基因,最終得到11個(gè)長(zhǎng)度為762-765bp的VP1基因序列。通過與參考毒株比對(duì)發(fā)現(xiàn),所擴(kuò)增的11個(gè)VP1序列在713-715bp之間存在3nt的插入,而Liaocheng/160112在727-729bp之間還存在3nt的缺失,因此導(dǎo)致其長(zhǎng)度有所不同。將本研究所得的11個(gè)VP1序列與GenBank中的參考毒株進(jìn)行同源性分析,結(jié)果顯示,分離的11個(gè)VP1序列之間的同源性在79.3-100%之間,其中,Ji’nan/Jiyang/171226與Tai’an/171222兩條序列的同源性為100%,很可能是同一株病毒。本研究的11個(gè)VP1序列與參考毒株的同源性在78.0-88.6%之間,氨基酸同源性在79.9-97.6%之間,說明所分離的VP1序列與參考毒株之間存在著一定的變異。根據(jù)PKV VP1系統(tǒng)進(jìn)化樹,可以將其分為5個(gè)基因型(G1-G5),本研究所分離的11個(gè)VP1序列均處于G1中,并且處在三個(gè)分支上,表明PKV VP1序列的遺傳和變異具有一定的地域性。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S858.28
【圖文】：

4圖 1-1 病毒粒子電鏡圖（引自 Yamashita et al., 2003）ig.1-1 Virus particle electron microscope（Yamashita et al., 2003

圖 1-2 嵴病毒的基因結(jié)構(gòu)Fig.1-2 Gene structure of kobuvirus.2.6 嵴病毒的蛋白結(jié)構(gòu)及功能研究表明，嵴病毒多聚蛋白的剪切位點(diǎn)與其他微小核糖核酸病毒科病毒十分相似剪切位點(diǎn)經(jīng)常位于谷氨酸（glutamine）和其他氨基酸之間，而該氨基酸通常為丙

圖 3-1 PKV 的 RT-PCR 檢測(cè)ig. 3-1 Detection of PKV by RT-PC Marker DL2000; 1. RT-PCR produ

【參考文獻(xiàn)】

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1 謝榮輝;劉霞;趙靈燕;倪柏鋒;柴娟;王雅婷;吳峗z

本文編號(hào)：2794929