【摘要】：背景:SLC14α1基因編碼UTB蛋白,介導(dǎo)尿素的跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)。UTB主要表達(dá)于腦組織、腎臟、心臟、睪丸組織。Dahl S大鼠給予高鹽飲食后,大鼠腦組織脈絡(luò)叢基因芯片結(jié)果顯示SLC14α1基因表達(dá)明顯下調(diào)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn):SLC14α1基因在Dahl S大鼠腦組織脈絡(luò)叢中表達(dá);給予高鹽飲食2w后,SLC14α1基因表達(dá)明顯下調(diào),腦脊液鈉離子濃度升高,血壓顯著升高,提示SLC14α1基因參與鹽敏感性高血壓的發(fā)生,但其機(jī)制尚不清楚。本研究利用SLC14α1基因缺失小鼠為模型,給予高鹽飲食4w后,觀察小鼠平均動(dòng)脈血壓變化及腦脊液中鈉離子濃度的變化,并分析其機(jī)制。研究目的:觀察高鹽飲食對(duì)SLC14α1基因缺失小鼠動(dòng)脈血壓的影響,并探討其機(jī)制。方法與結(jié)果:1.SLC14α1基因缺失小鼠的獲得雜合子小鼠交配繁殖,鼠尾基因組DNA PCR結(jié)果顯示:野生型小鼠在400bp處有一條堿基片段;雜合小鼠在250bp和400bp處各有一條堿基片段;基因缺失小鼠在250bp處有一條堿基片段。2.高鹽飲食對(duì)SLC14α1基因缺失小鼠平均動(dòng)脈血壓的影響利用無創(chuàng)血壓計(jì)測(cè)量小鼠平均動(dòng)脈血壓,結(jié)果顯示:給予高鹽飲食4w,SLC14α1基因缺失小鼠平均動(dòng)脈血壓明顯上升(P0.05),而野生型小鼠平均動(dòng)脈血壓未見明顯差異。提示SLC14α1基因缺失后,高鹽飲食導(dǎo)致小鼠平均動(dòng)脈血壓上升。3.高鹽飲食對(duì)SLC14α1基因缺失小鼠尿液鈉離子的影響利用鈉離子試劑盒檢測(cè)小鼠尿液鈉離子發(fā)現(xiàn):SLC14α1基因缺失小鼠給予高鹽飲食后,尿液中鈉離子濃度明顯高于野生型小鼠。4.高鹽飲食對(duì)SLC14α1基因缺失小鼠血清醛固酮的影響利用試劑盒檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn):SLC14α1基因缺失小鼠給予高鹽飲食后,血清醛固酮的含量明顯下降。5.腦組織脈絡(luò)叢SLC14α1基因及蛋白的表達(dá)RT-PCR、Western-blot及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)小鼠腦組織脈絡(luò)叢SLC14α1基因和UTB蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)UTB表達(dá)于小鼠腦組織脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞。6.SLC14α1基因缺失對(duì)小鼠血清及腦脊液中尿素濃度的影響利用尿素氮試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示:SLC14α1基因缺失后,小鼠血清及腦脊液內(nèi)尿素濃度明顯升高。證實(shí)UTB介導(dǎo)尿素跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程,UTB缺失引起尿素轉(zhuǎn)運(yùn)障礙,導(dǎo)致血清及腦脊液尿素含量明顯增加。7.高鹽飲食對(duì)SLC14α1基因缺失小鼠血清及腦脊液鈉離子的影響利用試劑盒檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn):給予高鹽飲食后,與對(duì)照組小鼠相比,SLC14α1基因缺失小鼠血清、腦脊液中鈉離子濃度明顯升高(P0.05)。以上結(jié)果說明:高鹽飲食導(dǎo)致SLC14α1基因缺失小鼠血清鈉離子濃度增加,進(jìn)而導(dǎo)致鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)至腦脊液。8.高鹽飲食對(duì)SLC14α1基因缺失小鼠腦組織脈絡(luò)叢ENa C-α表達(dá)的影響RT-PCR、Western-blot和免疫組織化學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn):小鼠ENa C-α主要表達(dá)于腦組織脈絡(luò)叢的上皮細(xì)胞膜,高鹽飲食引起SLC14α1基因缺失小鼠腦組織脈絡(luò)叢ENa C-αm RNA及蛋白表達(dá)水平明顯上升(P0.05)。結(jié)果提示高鹽飲食增加SLC14α1基因缺失小鼠腦組織脈絡(luò)叢中ENa C-α的表達(dá),介導(dǎo)鈉離子從血液轉(zhuǎn)運(yùn)至腦脊液。9.高鹽飲食對(duì)SLC14α1基因缺失小鼠腦組織脈絡(luò)叢MR表達(dá)的影響RT-PCR結(jié)果顯示:SLC14α1基因缺失小鼠給予高鹽飲食后,腦組織脈絡(luò)叢的MR水平明顯高于野生型小鼠。10.高鹽飲食對(duì)SLC14α1基因缺失小鼠腦組織脈絡(luò)叢α1-Na+-K+-ATPase表達(dá)及活性的影響RT-PCR、Western-blot、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:小鼠α1-Na+-K+-ATPase主要表達(dá)于腦組織脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞膜;高鹽飲食引起SLC14α1基因缺失小鼠α1-Na+-K+-ATPase m RNA和蛋白的表達(dá)水平明顯上升。檢測(cè)其活性結(jié)果顯示:高鹽飲食導(dǎo)致SLC14α1基因缺失小鼠α1-Na+-K+-ATPase活性明顯上升(P0.05)。以上結(jié)果提示高鹽飲食增加SLC14α1基因缺失小鼠腦組織脈絡(luò)叢中α1-Na+-K+-ATPase的表達(dá)及活性,有助于鈉離子轉(zhuǎn)運(yùn)到腦脊液中。11.高鹽飲食對(duì)SLC14α1基因缺失小鼠血清AngⅡ的影響腦脊液鈉離子濃度增加導(dǎo)致交感神經(jīng)興奮性增強(qiáng),進(jìn)而導(dǎo)致血清中AngⅡ濃度增加。利用試劑盒檢測(cè)小鼠血清中AngⅡ發(fā)現(xiàn):給予高鹽飲食后,SLC14α1基因缺失小鼠血清中的AngⅡ含量明顯增加(P0.05)。說明高鹽飲食能夠增加SLC14α1基因缺失小鼠血清中AngⅡ的濃度,引起血壓升高。結(jié)論:SLC14α1基因缺失小鼠給予高鹽飲食4w后,脈絡(luò)叢ENa C-α、α1-Na+-K+-ATPase表達(dá)及活性增加,腦脊液鈉離子濃度增加,激活交感神經(jīng),血清AngⅡ濃度升高,引起動(dòng)脈血壓升高。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R544.1
【圖文】：

圖 3.1 小鼠的基因型鑒定（+/+: 野生型 -/-: 基因缺失型 +/-: 雜合型）Figure 3.1 Identification genotype in mice在 400bp 處有一條堿基片段；雜合子小鼠在 250bp 和 400bp 處各有一條堿基片段；純合子在 250bp 處有一條堿基片段飲食對(duì) SLC14α1 基因缺失小鼠生理狀態(tài)的影響雄性的野生型小鼠及 SLC14α1 基因缺失小鼠，分成 4 組，每組 6 普通飲食和高鹽飲食 4w。檢測(cè)各組小鼠飲水量及平均動(dòng)脈血壓。鹽飲食對(duì) SLC14α1 基因缺失小鼠飲水量的影響如圖 3.2 所示：SLC14α1 基因缺失小鼠給予高鹽飲食后，飲水量顯計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

圖 3.2 高鹽飲食對(duì) SLC14α1 基因缺失小鼠飲水量的影響Figure 3.2 Effect of high salt diet on the water intake in SLC14α1-/-miceP<0.05: 野生型小鼠高鹽飲食組 vs 野生型普通飲食組；#P<0.05: SLC14α1 基因缺失小鼠高鹽飲食組C14α1 基因缺失小鼠普通飲食組。SLC14α1+/+N: 野生型普通飲食組；SLC14α1+/+H: 野生型小鼠高鹽； SLC14α1-/-N: SLC14α1 基因缺失小鼠普通飲食組；SLC14α1-/-H: SLC14α1 基因缺失小鼠高鹽飲食后面圖示均以此為準(zhǔn)，不再敘述。2.2 高鹽飲食對(duì) SLC14α1 基因缺失小鼠平均動(dòng)脈血壓的影響結(jié)果如圖 3.3 所示：給予高鹽飲食 4w，SLC14α1 基因缺失小鼠平均動(dòng)脈明顯升高（P<0.05）。其中 SLC14α1 基因缺失小鼠平均動(dòng)脈壓（MAP）升 30±1.67 mmHg；野生型小鼠組，高鹽飲食后平均動(dòng)脈壓（MAP）僅升高5±1.76 mmHg。

圖 3.3 高鹽飲食對(duì) SLC14α1 基因缺失小鼠平均動(dòng)脈血壓的影響Figure 3.3 Effect of high salt diet on MAP in SLC14α1-/-mice*P<0.05: SLC14α1 基因缺失小鼠高鹽飲食組 vs SLC14α1 基因缺失小鼠普通飲食組；#P<0.05: SLC14α1 基因缺失小鼠高鹽飲食組 vs 野生型高鹽飲食組3.3 高鹽飲食引起 SLC14α1 基因缺失小鼠平均動(dòng)脈血壓升高的機(jī)制研究3.3.1 高鹽飲食對(duì) SLC14α1 基因缺失小鼠腎臟鈉水潴留的影響3.3.1.1 高鹽飲食對(duì) SLC14α1 基因缺失小鼠尿液鈉離子濃度的影響結(jié)果如圖 3.4 所示：給予高鹽飲食 4w，SLC14α1 基因缺失小鼠尿液鈉離子濃度明顯升高（P<0.05）。提示 SLC14α1 基因缺失小鼠給予高鹽飲食后，腎臟排泄鈉離子增多，不會(huì)導(dǎo)致鈉水潴留。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 羅怡;陳明;;鹽敏感性高血壓研究進(jìn)展[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2013年05期

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本文編號(hào)：2762226