【摘要】：疾病尤其是病毒性傳染病是現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)的一大天敵,藥物、疫苗和抗生素等的頻繁使用引發(fā)了耐藥性頻發(fā)、藥物殘留嚴(yán)重等問題的出現(xiàn),導(dǎo)致我國養(yǎng)豬業(yè)產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟損失。因此,提高豬自身的免疫力和抗病力,成為目前養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展中急需解決的問題。過去的研究發(fā)現(xiàn)我國地方豬種大蒲蓮豬的抗病性和免疫能力明顯優(yōu)于國外長白豬,大蒲蓮豬的這種特性可以作為抗病育種的優(yōu)質(zhì)品種與種質(zhì)資源,為尋找豬抗病育種候選基因提供優(yōu)良的素材。而抗病力的高低與免疫系統(tǒng)的應(yīng)答反應(yīng)能力有關(guān),模式識別受體(PRRs)在先天免疫系統(tǒng)中主要用來識別病原相關(guān)分子模式,在動物機體抵御病原微生物入侵過程中發(fā)揮重要作用。而抗菌肽作為一種小肽類分子,在動物機體中廣泛分布,具有廣譜的抗菌性和抗病毒性。本試驗采用熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)和Western blot技術(shù)檢測9種TLRs(TLR1~TLR9)、5種NLRs(NOD1、NOD2、CIITA、NLRC3和NLRX1)以及2種抗菌肽(pBD-1和PR-39))在不同月齡的兩品種豬的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、扁桃體、下頜淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)等組織中的表達,并進行差異表達分析,以期尋找大蒲蓮豬和長白豬中免疫相關(guān)差異表達基因,進而為豬抗病育種提供理論依據(jù),加速實現(xiàn)抗病育種的最終目標(biāo)。本研究的結(jié)果如下:1.9種TLRs基因的差異表達分析:在兩品種豬的8種組織中均有表達,其中TLR1和TLR2在下頜淋巴結(jié)表達最高,TLR3在腎臟最高,TLR5和TLR6在肝臟最高,TLR4、TLR7、TLR8和TLR9在脾臟最高;在兩品種豬之間,在大蒲蓮豬的表達顯著高于長白豬(P0.05);在表達時序上,多數(shù)TLRs基因隨著月齡的增加表達水平也不斷升高。2.5種NLRs基因的差異表達分析:在兩品種豬8種組織中均有表達,其中NOD1、NOD2和CⅡTA在脾臟表達最高,NLRC3在下頜淋巴結(jié)最高,NLRX1在肝臟最高;在兩品種豬之間,所有組織中大蒲蓮豬的表達顯著高于長白豬(P0.05);在表達時序上,多數(shù)NLRs的表達在4月齡最高,然后隨之下降。3.2種抗菌肽基因的差異表達分析:在所檢測的組織中均有表達,其中pBD-1在扁桃體表達最高,PR-39在腸系膜淋巴結(jié)中最高;在兩品種豬之間,其在大蒲蓮豬中的表達顯著高于長白豬(P0.05);在表達時序上,兩個基因在各組織中均在4月齡的表達水平最高,隨后開始下降。4.檢測TLR4和NOD2在不同器官和組織中的蛋白表達水平:結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩個蛋白在各檢測組織中均有表達,且與熒光定量的結(jié)果具有一致性。TLR4的表達趨勢為:脾臟肺臟扁桃體心臟腎臟肝臟下頜淋巴結(jié)腸系膜淋巴結(jié),而NOD2的表達趨勢為:脾臟肺臟扁桃體腸系膜淋巴結(jié)下頜淋巴結(jié)肝臟腎臟心臟。綜上所述,三類免疫相關(guān)基因在大蒲蓮豬中表達顯著高于長白豬(P0.05),這可能是大蒲蓮豬抗病力和免疫力高于長白豬的重要原因。此外,這些免疫相關(guān)基因的表達受品種、年齡和組織的影響,可能會導(dǎo)致豬抗病力的遺傳差異。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S828
【圖文】：

圖 1 RNA 電泳圖Figure 1 Electrophoretogram of RNA心臟；2：肝臟；3：脾臟；4：肺臟；5：腎臟；6：扁桃體；7：頜下淋巴結(jié)；8：腸系膜淋巴結(jié)；M：DNA Marker Heart; 2: Liver; 3: Spleen; 4: Lung; 5: Kidney; 6: Tonsil; 7: mandibular lymph nodes; 8: mesenteric lymph nDL 5000 DNA Marker.大蒲蓮豬和長白豬各組織中目的基因表達水平qRT-PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線反轉(zhuǎn)錄得到的各組合的 cDNA 等體積混池后，進行 2 倍稀釋梯度進行稀釋目的基因和三個內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線、溶解曲線和擴增曲線，各引物擴增示，擴增效率均在合適的范圍（90％～110％）內(nèi)；方程 R2值都接近 1，說好；溶解曲線均是單峰，說明引物特異性強，三個內(nèi)參基因如圖 2、3、4

圖 2 三個內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線、溶解曲線和擴增曲線Figure 2 Standard Curve, melting Curve and amplification Plots of the three reference genes注：A：PPIA 基因；B：RPL4 基因；C：YWHAZ 基因；（1）：標(biāo)準(zhǔn)曲線；（2）：溶解曲線；（3）：擴增曲線Note:A: PPIAgene, B: RPL4 gene, C: YWHAZ gene. (1): Standard curve, (2): Dissociation Curve, (3):Amplification Plots.

26圖 3 TLRs 基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線、溶解曲線和擴增曲線Figure 3 Standard Curve, melting Curve and amplification Plots of the TLRs genes注：A：TLR1 基因；B：TLR2 基因；C：TLR3 基因；D：TLR4 基因；E：TLR5 基因；F：TLR6 基因；G：TLR基因；H： TLR8 基因；I：TLR9 基因；（1）：標(biāo)準(zhǔn)曲線；（2）：溶解曲線；（3）：擴增曲線Note:A: TLR1 gene, B: TLR2 gene, C: TLR3 gene, D: TLR4 gene, E: TLR5 gene, F: TLR6 gene, G: TLR7 gene, H: TLR8gene, I: TLR9 gene. (1): Standard curve, (2): Dissociation Curve, (3):Amplification Plots.

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 楊玉榮;佘銳萍;梁宏德;;Toll-NF-κB信號途徑及其介導(dǎo)的功能[J];細胞生物學(xué)雜志;2007年04期

2 單體中;王燕;汪以真;;不同生長階段豬抗菌肽PR-39基因的表達差異[J];中國獸藥雜志;2005年12期

本文編號：2752496